| Project/Area Number |
09877418
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Chemical pharmacy
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
正山 征洋 九州大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (70037604)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田中 宏幸 九州大学, 大学院・薬学研究科, 助手 (30253470)
森元 聡 九州大学, 大学院・薬学研究科, 助教授 (60191045)
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| Project Period (FY) |
1997 – 1999
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1999)
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| Budget Amount *help |
¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000)
Fiscal Year 1999: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 1998: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 1997: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
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| Keywords | 抗フォルスコリンモノクローナル抗体 / scFV遺伝子 / フオルスコリン / Coleus forskohlii / 組換え植物 / フオルスコリン高含有株 / MAb / scFv / 生合成制御 / フォルスコリン / 阿片アルカロイド / 大麻成分 / ステロイダルアルカロイド配糖体 / scFV |
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| Research Abstract |
小型化抗体遺伝子を植物へ導入することにより、抗体と2次代謝産物とのコンプレックスを生成し、系外へ除去されることにより2次代謝産物の生合成経路のキャパシティーが増大し、より多量の2次代謝産物を生産蓄積するというアイディアに基ずくものである。
Agrobacteriumに組み換えるために、まず大腸菌でのscFVの発現系を構築した。抗forskolinMAb産生ハイブリドーマからmRNAを抽出し、逆転写によりcKNAを合成したVHとVLの可変部分に相補的なプライマーを用いてPCRを行いVH,VLを増幅した。VH,VLをペプチドリンカーにより連結しscFV遺伝子を構築する。このものをpET-28aベクターへ組み換えた。本ベクターを大腸菌BL21に形質転換し大量発現系を構築し、IPTGの添加によりscFVを発現させた。scFVはin clusion bodyとして発現するため尿素で可溶化し希釈法により巻き戻した後His-tagを用いたアフィニティーカラムにより精製を行うことによりscFVタンパクを得ることが出来た。本法によれば培地100nl当たり約6mgのscFVが得られる。現在までに抗forskolinMAb scFVとforskolinとのモデリングを行っている。現在scFV遺伝子を、Agrobacteriumに組み換え中で、今後forskolin含有Coleus horskohliiに組み換え植物体で発現させることによりforskolinの生合成をコントロールし、forskolin高含有株を作出すべく実験を進めている。
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