p53遺伝子欠損マウスを用いた分化間葉細胞系の樹立

Research Project

Project/Area Number	09878210
Research Category	Grant-in-Aid for Exploratory Research
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	Biomedical engineering/Biological material science
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	戸田口淳也京都大学, 生体医療工学研究センター, 助教授 (40273502)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	中村孝志京都大学, 大学院・医学研究科, 教授 (10201675)
Project Period (FY)	1997
Project Status	Completed (Fiscal Year 1997)
Budget Amount *help	¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000) Fiscal Year 1997: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Keywords	p53遺伝子 / ノックアウトマウス / 骨芽細胞 / 破骨細胞 / 脂肪細胞
Research Abstract	1.p53遺伝子欠損マウスからの骨芽細胞様細胞系の樹立 p53遺伝子欠損マウスの新生仔頭蓋冠より細胞を単離し、アルカリフォスファターゼ活性を指標に、分化した骨芽細胞として形質をもった細胞系を樹立した(MMC2)。MMC2はアルカリフォスファターゼ活性に加えて、I型コラーゲン及びオステオカルシン遺伝子を発現している。またascorbic acid添加で培養を継続すると、in vitroにおいて石灰化巣を形成する。旺盛な増殖能を示し、不死化細胞と考えられるが、接触阻止及び足場依存症の増殖を示し、癌細胞としての形質は有していない。ヌードマウスでの腫瘍形成も認められないが、異所性骨化巣を形成する。In vitroにおいてBMP2及び4を産生し、かつBMP受容体を発現していることより、MMC2自体が骨化巣を形成した可能性と、宿主細胞に作用して骨化を誘導した可能性が考えられた。 2.p53遺伝子欠損マウスからの破骨細胞様細胞系の確立新生仔マウス骨髄から間質細胞を分離、クローニングしたのち、活性型Vitamin D3(VD3)添加の培養で酒石酸抵抗性酸ファスファターゼ(TRAP)活性を指標に破骨細胞の前駆細胞と思われる細胞系を単離した(BM2C3)。BM2C3はVD3及びprostagladin Eを添加して培養するとTRAP陽性の多核細胞を多数形成する。しかしdentin sliceを用いた実験では、明らかな骨吸収窩は示さず、TRAP陽性所見との解離が認められた。 p53遺伝子欠損マウスからの脂肪前駆細胞系の確立同様に新生仔マウス骨髄間質細胞から得られたクローンの中からdexamethason添加の培養にて、豊富な脂肪摘を有するadipocyte様の形態を呈する細胞系を樹立した。現在、そのadipocyteとしての形質を解析中である。