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ヒストンH3バリアントとその相互作用因子によるクロマチン形成機構の解析

Research Project

Project/Area Number 09J04280
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section国内
Research Field Structural biochemistry
Research InstitutionWaseda University

Principal Investigator

越阪部 晃永  早稲田大学, 理工学研究科, 特別研究員(DC1)

Project Period (FY) 2009 – 2011
Project Status Completed (Fiscal Year 2011)
Budget Amount *help
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2011: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2010: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2009: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Keywordsヌクレオソーム / ヒストン / ヒストンバリアント / SPT2 / ヒストンシャペロン / NASP / クロマチン
Research Abstract

本研究の目的は、ヒストンH3のバリアントやそれらと相互作用する因子群を、生化学的および構造生物学的手法を用いて解析し、H3バリアントおよびそれらの相互作用因子群によるクロマチン構造形成のメカニズムを明らかにすることである。これまでに、ヒト由来のH3について、8つのバリアントが報告されているが、それらのクロマチン形成に関する詳細な役割は未だ明らかにされていない。そこで、H3バリアントの生体内における特異的な機能発現は、それぞれの相互作用因子群によってなされていると考え、H3バリアントと相互作用する因子群を、リコンビナントヒストンを用いたプロテオーム解析法により探索した。その結果、新規ピストン相互作用因子としてヒトSPT2を同定した。ヒトSPT2は出芽酵母の転写因子SPT2と共通するSpt2ドメインを有するタンパク質であるが、機能未知のタンパク質であった。そこで、SPT2の機能解析を行うために、リコンビナントタンパク質として精製したヒトSPT2を用いた生化学的解析を行った。その結果、精製したヒトSPT2はコアヒストンと直接相互作用し、ヌクレオソームの形成を促進した。また、ヒトSPT2はDNAとも直接結合し、特に分岐したDNA基質に優先的に結合した。
さらに、HeLa細胞を用いた免疫染色実験を行い、SPT2の局在解析を行った。その結果、SPT2は核小体領域に局在し、特にrRNAの転写を行うRNAポリメラーゼIと共局在した。次に、SPT2の生体内での機能を解析するために、SPT2欠損ニワトリDT40細胞を樹立し、細胞生物学的解析を行った。その結果、SPT2欠損細胞がRNAポリメラーゼIの阻害剤に対して著しく感受性を示した。以上の結果から、新規ヒストン相互作用因子として同定したSPT2が、これまで不明な点が多かった核小体領域のクロマチンのダイナミクスに関与することが考えられた。

Report

(3 results)
  • 2011 Annual Research Report
  • 2010 Annual Research Report
  • 2009 Annual Research Report
  • Research Products

    (46 results)

All 2012 2011 2010 2009 Other

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results) Presentation (37 results) Book (1 results) Remarks (3 results)

  • [Journal Article] Structures of human nucleosomes containing major histone H3 variants2011

    • Author(s)
      Tachiwana H, Osakabe A, Shiga T, Miya Y, Kimura H, Kagawa W, Kurnmizaka H
    • Journal Title

      Acta Crystallogr.D Biol.Crystallogr.

      Volume: 67 Issue: 6 Pages: 578-583

    • DOI

      10.1107/s0907444911014818

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      Tachiwana H, Kagawa W, Shiga T, Osakabe A, Miya Y, Saito K, Hayashi-Takanaka Y, Oda T, Sato M, Park SY, Kimura H, Kurumizaka H
    • Journal Title

      Nature

      Volume: 476 Issue: 7359 Pages: 232-235

    • DOI

      10.1038/nature10258

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      Horikoshi N, Tachiwana H, Saito K, Osakabe A, Sato M, Yamada M, Akashi S, Nishimura Y, Kagawa W, Kurumizaka H.
    • Journal Title

      Acta Crystallographica.Section D, Biological Cry stallography

      Volume: 67(pt2) Pages: 112-118

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      Osakabe A, Tachiwana H, Matsunaga T, Shiga T, Nozawa RS, Obuse C, Kurumizaka H.
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry

      Volume: 285(16) Pages: 11913-11921

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      Tachiwana H, Kagawa W, Osakabe A, Kawaguchi K, Shiga T, Hayashi-Takanaka Y, Kimura H, Kurumizaka H.
    • Journal Title

      Proceedings of the National Academy of Sciences

      Volume: 107(23) Pages: 10454-10459

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      宮城県、仙台秋保温泉ホテルニュー水戸屋
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      2012-01-26
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      第29回染色体ワークショップ
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      宮城県、仙台秋保温泉ホテルニュー水戸屋
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      2012-01-26
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      宮城県、仙台秋保温泉ホテルニュー水戸屋
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      2012-01-26
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      越阪部晃永, 立和名博昭, 高久誉大, 堀哲也, 小布施力史, 木村宏, 深川竜郎, 胡桃坂仁志
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      第34回日本分子生物学会年会
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      神奈川県、パシフィコ横浜
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      第34回日本分子生物学会年会
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      神奈川県、パシフィコ横浜
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      2011-12-15
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      竹内康造, 西野達哉, 堀哲也, Karen E.Gascoigne, 立和名博昭, 越阪部晃永, 胡桃坂仁志, Iain M.Cheeseman, 深川竜郎
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      第34回日本分子生物学会年会
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      神奈川県、パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2011-12-15
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  • [Presentation] Crystal structure and biochemical property of the human centromere specific nucleosome2011

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      立和名博昭, 香川亘, 志賀達也, 松本亮平, 宮優太, 越阪部晃永, 林(高中)陽子, 小田隆, 佐藤衛, 朴三用, 木村宏, 胡桃坂仁志
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      第34回日本分子生物学会年会
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      神奈川県、パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2011-12-15
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      小林航, 高久誉大, 江崎惇朗, 江川史朗, 宮優太, 越阪部晃永, 立和名博昭, 胡桃坂仁志
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      第34回日本分子生物学会年会
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      神奈川県、パシフィコ横浜
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      2011-12-15
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      町田晋一, 高久誉大, 江崎惇朗, 小林航, 江川史朗, 宮優太, 越阪部晃永, 立和名博昭, 胡桃坂仁志
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      第34回日本分子生物学会年会
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      神奈川県、パシフィコ横浜
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      2011-12-15
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      宮優太, 立和名博昭, 越阪部晃永, 胡桃坂仁志
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      第34回日本分子生物学会年会
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      神奈川県、パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2011-12-15
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  • [Presentation] 新規ヒストン相互作用因子ヒトSPT2の機能解析2011

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      越阪部晃永, 立和名博昭, 高久誉大, 堀哲也, 小布施力史, 木村宏, 深川竜郎, 胡桃坂仁志
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      北海道、クラッセホテル北広島
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      Hiroaki Tachiwana, Wataru Kagawa, Tatsuya Shiga, Akihisa Osakabe, Yoko Hayashi-Takanaka, Sam-Yong Park, Hiroshi Kimura, Hitoshi Kurumizaka
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      EMBO Conference Series Chromatin and Epigenetics
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      ドイツ、ハイデルベルク
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      Akihisa Osakabe, Hiroaki Tachiwana, Motoki Takaku, Tetsuya Hori, Chikashi Obuse, Hiroshi Kimura, Tatsuo Fukagawa, Hitoshi Kurumizaka
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      ドイツ、ハイデルベルク
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      Awaji Yumebutai International Conference Center
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      International Symposium 'Physicochemical Field for Genetic Activities'
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      Awaji Yumebutai International Conference Center
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      2011-01-24
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      Hiroaki Tachiwana, Wataru Kagawa, Tatsuya Shiga, Akihisa Osakabe, Yoko Hayashi-Takanaka, Sam-Yong Park, Hiroshi Kimura, Hitoshi Kurumizaka
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      International Symposium 'Physicochemical Field for Genetic Activities'
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      Awaji Yumebutai International Conference Center
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      第28回 染色体ワークショップ
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      加賀-山代温泉 瑠璃光
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      立和名博昭、香川亘、志賀達也、越阪部晃永、林(高中)陽子、木村宏、胡桃坂仁志
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      神戸ポートアイランド
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      2010-12-09
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    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
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      2010-12-09
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      越阪部晃永、立和名博昭、堀哲也、小布施力史、木村宏、深川竜郎、胡桃坂仁志
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      2010-12-09
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      胡桃坂仁志、立和名博昭、香川亘、志賀達也、越阪部晃永、林(高中)陽子、木村宏
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      越阪部晃永、立和名博昭、松永嵩明、志賀達也、野澤竜介、小布施力史、胡桃坂仁志
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      パシフィコ横浜
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  • [Presentation] Structural feature of the CENP-A nucleosome in the vertebrate centro-mere.2009

    • Author(s)
      堀哲也, 立和名博昭, 越阪部晃永, 大川克也, 小布施力史, 胡桃坂仁志, 深川竜郎
    • Organizer
      第32回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2009-12-10
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Presentation] Fanconi貧血原因遺伝子FANCD2およびFANCIの生化学的機能解析(Functional analyses of the Fanconi anemia proteins, FANCD2 and FANCI)2009

    • Author(s)
      佐藤浩一, 戸田和江, 古越聡, 越阪部晃永, 立和名博昭, 堂前直, 石合正道, 小布施力史, 木村宏, 高田穣, 胡桃坂仁志
    • Organizer
      第32回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2009-12-10
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Presentation] セントロメア特異的H3バリアントCENP-Aを含むヌクレオソームの構造解析(Structural analysis of the centromere-specific nucleosome)2009

    • Author(s)
      立和名博昭, 香川亘, 志賀達也, 川口紘一郎, 越阪部晃永, 胡桃坂仁志
    • Organizer
      第32回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2009-12-10
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Presentation] セントロメアDNA結合タンパク質CENP-T/CENP-W複合体の生化学的解析(Biochemical analysis of the CENP-T/CENP-W complex, which binds ce-ntromere DNA)2009

    • Author(s)
      竹内康造, 堀哲也, 立和名博昭, 越阪部晃永, 胡桃坂仁志, 深川竜郎
    • Organizer
      第32回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜
    • Year and Date
      2009-12-10
    • Related Report
      2009 Annual Research Report
  • [Book] 目的別で選べる核酸実験の原理とプロトコール(ゲル濾過クロマトグラフィー法)2011

    • Author(s)
      越阪部晃永、立和名博昭、胡桃坂仁志
    • Total Pages
      264
    • Publisher
      羊土社
    • Related Report
      2011 Annual Research Report
  • [Remarks] 所属研究室のwebページ

    • URL

      http://www.eb.waseda.ac.jp/kurumizaka/

    • Related Report
      2011 Annual Research Report
  • [Remarks] 所属研究室のwebページ

    • URL

      http://www.eb.waseda.ac.jp/kurumizaka/

    • Related Report
      2010 Annual Research Report
  • [Remarks] 所属研究室のwebページ

    • URL

      http://www.eb.waseda.ac.jp/kurumizaka/

    • Related Report
      2009 Annual Research Report

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Published: 2009-04-01   Modified: 2024-03-26  

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