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新しいカルモデュリンキナーゼカスケードを介した細胞内カルシウム情報伝達機構の解析

Research Project

Project/Area Number 09J08571
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section国内
Research Field Living organism molecular science
Research InstitutionKagawa University

Principal Investigator

藤本 智仁  香川大学, 医学部, 特別研究員(DC1)

Project Period (FY) 2009 – 2011
Project Status Completed (Fiscal Year 2011)
Budget Amount *help
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2011: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2010: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2009: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
KeywordsCaMKK / Syndapin I / リン酸化酵素 / GTP / STO-609
Research Abstract

我々は、CaMKKの未知なる生理的機能を検討するため、CaMKKの基質分子をATP類似化合物を用いることで探索し、SyndapinIを発見するに至った。本研究で用いられた方法は、通常組織抽出液中に存在する内在性のタンパク質リン酸化酵素がATP類似化合物をリン酸基供与体として使用できない性質を利用したもので、ラット脳抽出液をATP類似化合物存在下に、本研究にて見いだしたATP類似化合物をリン酸基供与体として使用できるCaMKK□F230G(Phe230Gly)変異体と反応させ、抗リン酸化Thr抗体を用いてウエスタンブロットを行ない、リン酸化の上昇する基質候補タンパク質を探索するという方法である。検出された分子量50kDaのCaMKK基質候補分子を各種クロマトグラフィーを用いて部分精製後、質量分析にてSyndapinIと同定した。SyndapinIは、試験管内または遺伝子導入した培養細胞においても、CaMKKによるThr355のリン酸化が検出された。
SyndapinIは、Dynaminと協調して、神経終末端におけるエンドサイトーシスによるシナプス小胞の回収および再生に関与していると考えられている。またCaMKKによるリン酸化部位の近傍にはEHD1が結合するNPFモチーフが2カ所存在し、さらにEHD1はリン脂質2重膜を用いたin vitroの実験で、小胞化を抑制する役割を持つ可能性が指摘されている。

Report

(3 results)
  • 2011 Annual Research Report
  • 2010 Annual Research Report
  • 2009 Annual Research Report
  • Research Products

    (3 results)

All 2011 2010

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] Identification of a novel CaMKK substrate2011

    • Author(s)
      Tomohito Fujimoto, et al
    • Journal Title

      Biochem Biophys Res Commun

      Volume: 410 Issue: 1 Pages: 45-51

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2011.05.102

    • Related Report
      2011 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] ATPアナログを用いたCaMKKの新規標的基質分子の同定2011

    • Author(s)
      藤本智仁
    • Organizer
      第84回日本生化学会大会
    • Place of Presentation
      国立京都国際会館(京都)
    • Year and Date
      2011-09-23
    • Related Report
      2011 Annual Research Report
  • [Presentation] Ca^<2+>/Calmodulin-Dependent Protein Kinase Kinase Can Utilize GTP as a Phosphate Donor2010

    • Author(s)
      藤本智仁
    • Organizer
      BMB2010(第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会)
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド(兵庫県)
    • Year and Date
      2010-12-10
    • Related Report
      2010 Annual Research Report

URL: 

Published: 2009-04-01   Modified: 2024-03-26  

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