| Project/Area Number |
10151226
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
西條 将文 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (90221986)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中津 可道 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (00207820)
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| Project Period (FY) |
1998
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1998)
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| Budget Amount *help |
¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000)
Fiscal Year 1998: ¥3,200,000 (Direct Cost: ¥3,200,000)
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| Keywords | ヌクレオチド除去修復 / 色素性乾皮症 / XPA / RPA / 皮膚癌 / RLGS / dermo-1 / 遺伝子欠損マウス |
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| Research Abstract |
(1) ヌクレオチド除去修復(NER)において、XPAとRPAの結合が重要な役割を果たしている。欠失XPAを用いた結合実験およびNMRによる解析より、XPA中央部のZnフィンガー領域がRPAp70のDNA結合ドメインと結合することを明らかにした。この結合は高塩濃度で解離するので、Znフィンガー領域に存在する酸性アミノ酸のクラスターが結合に関与していると考えられる。
(2) XPAのN末端は、RPAp34との結合領域である。この領域を欠失したXPAを発現させたA群XP細胞では、正常細胞に比べ、紫外線に対してわずかに感受性を示し、DNAからのピリミジンダイマーの除去も低下していた。この細胞の抽出液により試験管内NER反応を行ったところ、正常細胞抽出液とくらべ低下していた。A群XP細胞抽出液にN末端欠失XPA蛋白質を加えた場合にも、同様の結果が得られた。この欠失XPAは、p70との結合領域が残っているのでRPAとは結合できるが、それだけでは十分でなくp34との結合が機能的に重要であることが示唆された。
(3) XPA遺伝子欠損マウス由来の紫外線誘発皮膚癌細胞株、皮膚癌組織、および正常皮膚組織よりDNAを抽出し、RLGS法により、皮膚癌細胞および癌組織において共通に変化しているスポット19例についてDNAを単離した。サザンブ口ツティングにより、減衰スポット18例、増幅スポット5例、計23例のDNA断片において癌細胞特異的にゲノム構造の変化が認められた。そのうち6例は既知の遺伝子、2例はESTデータベースにおいて認められた遺伝子であったが、dermo-1遺伝子でのみ皮膚癌細胞における発現の上昇が確認された。その他の15例のDNA断片については発現が認められなかった。
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