DNA結合能を有するキネシン様蛋白質Kidの染色体分配における機能

• Project/Area Number: 10175209
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 井上 純一郎 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (70176428)
• Project Period (FY): 1998
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1998)
• Budget Amount: ¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000); Fiscal Year 1998: ¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000)
• Keywords: キネシン様蛋白質 / DNA結合蛋白質 / 染色体分配 / 細胞分裂

Research Abstract

近年、キネシン様分子が、細胞核分裂過程に深く関わっていることが示されている。我々はDNA結合能を有するキネシン様蛋白質Kidを同定した。Kidは染色体分配に関与する可能性があり、又、細胞分裂(M期)の制御機構にはリン酸化が重要であることから、本年度はKidの生理機能を更に詳しく解析するために、Kid機能のリン酸化による制御を検討した。
Kid蛋白質を、M期の細胞抽出液から免疫沈降し、リン酸化反応を行った。その結果から、Kid蛋白質は、M期でリン酸化酵素と複合体を形成し、リン酸化されることが確認された。Kid蛋白質は、M期で重要な役割を担っているcdc2ファミリー蛋白質により、リン酸化されうる配列を有しており、cdc2/サイクリンBによりリン酸化される可能性が示唆される。そこで、大腸菌にて作製、精製したKid-GST融合蛋白質と、ヒトデから精製したcdc2/サイクリンBを用いin vitroでリン酸化反応を行ったところ、Kidのリン酸化がみられた。又、KidはG2期からM期において機能するPLKキナーゼと会合することが外国のグループにより指摘されている。そこで、M期の細胞溶解液から、PLKキナーゼを免疫沈降し、リン酸化反応を行ったところ、KidはPLK複合体中に存在し、リン酸化されることが分かった。以上のことから、KidはM期においてcdc2/サイクリンB、及び、PLKによってリン酸化されることが明かとなった。リン酸化によりKidの機能がどのように制御されるのか、現在解析中である。

Research Products

• [Publications] Horie・R.: "A novel domain in the CD30 cytoplasmic tail mediates NFκB activation." Int.Immunol.10. 203-210 (1998)
• [Publications] Mizushima S.: "Cloning and characterization of a cDNA encoding the human homolog of tumor necrosis factor receptor-associated factor 5 (TRAF5)." Gene. 207. 135-140 (1998)
• [Publications] Suzuki K: "Identification and expression of the Xenopus homolog of mammalian p100-NFκB2." Gene. 206. 1-9 (1998)
• [Publications] Kashiwada M.: "Tumor necrosis factor receptor-associated factor 6 (TRA-F6) stimulates extracellular sig-nal-regulated kinase (ERK) activity in CD40 signaling along Ras-independent pathway." J.Exp.Med.187. 237-244 (1998)
• [Publications] Kimura,H.: "Molecular analysis of constitutive IL-1a gene expression in human melanoma cells: Autocrine stimulation through NF-κB activation by endogenous IL-1a." Cytokine. 10. 872-879 (1998)
• [Publications] Suginaka,R.: "Induction of apoptosis in human pancreatic carcinoma cells by a synthetic bleomycin-like ligand." Jpn.J.Cancer Res.89. 947-953 (1998)
• [Publications] Kittaka A.: "Oligonucleotides bearing 5-formyl-2′-O-methyluridine: Selective binding affinity to the NF-κB (p50)2 homo-and p50/p65 heterodimers." Bioorg.Med.Chem.Lett.8. 3207 (1998)
• [Publications] Yoshimoto T.: "Interleukin-12 expression in Bcells by transformation with Epstein-Barr virus." Biochem.Biophy.Res.Commun.252. 556-560 (1998)
• [Publications] Kittaka A.: "Introduction of 5-Formyl-2′-deoxyuridine into a kB site: Critical discrimination of a base structure in major groove by NFκB p50 homodimer." Synlett. (in press). (1999)
• [Publications] Tsukamoto N.: "Two differently regulated NFκB activation pathways triggered by the cytoplasmic tail of CD40." Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(in press). (1999)
• [Publications] Ninomiya-Tsuji J.: "The kinase TAK1 can activate the NIK-IκB as well as the MAP kinase cascade in the IL-1 signaling pathway." Nature. (in press). (1999)