| Project/Area Number |
10670589
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 一般 |
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| Research Field |
Neurology
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
原 英夫 九大, 医学部, 講師 (00260381)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉良 潤一 九州大学, 医学部, 教授 (40183305)
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| Project Period (FY) |
1998 – 2000
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1999)
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| Budget Amount *help |
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 1999: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1998: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
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| Keywords | アストロサイト / 自己反応性T細胞抑制因子 / 遺伝子クローニング / アポトーシス |
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| Research Abstract |
今年度では、アストロサイト由来の自己反応性T細胞抑制因子を解明し、その遺伝子をクローニングした.
マウス由来のアストロサイト細胞株(G26-24)を培養し、IFN-γで処理したアストロサイトの1st strand cDNAより、未処理のアストロサイトのmRNAをsubtractionし、一本鎖のsubtracted cDNAライブラリーを作成した.これをプローブとして先に作成しておいたIFN-γで処理したアストロサイト由来のcDNAファージライブラリーをスクリーニングした.その結果、IFN-γで処理したアストロサイトに特異的に発現しているcDNA、約100クローンが得られた.
100個のcDNAクローンを全てシークエンスし解析した.各クローンのhomology検索をNIHのgene databaseを用いて行ったところ、既知のクローンは、47クローンで、heat shock proteinやMHC class Iなどがあった.一部homologyが認められたクローンは7個で、espinなどの遺伝子と50-100塩基の範囲でhomologyが認められたが、残りのシークエンスは未知であった.全く未知のクローンは46クローンであった.
未知のcDNAクローンを動物細胞発現ベクターに組み込み、CHO cell lineへ遺伝子導入し、蛋白を発現させた.一方で、SJL/JマウスにMBPを免疫し、そのリンパ節・脾細胞からリンパ球を分離し、MBP反応性T細胞株を作成した.このMBP反応性T細胞を先程の遺伝子導入したCHO cell lineの上で共培養し、どの遺伝子を導入したCHO cell lineにおいてT細胞にapoptosisが誘導されるか解析した.数個のクローンにおいて、T細胞のapoptosisの誘導が認められた.
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