Listeria monocytogenesの病原性発現におけるストレス蛋白質の役割

Research Project

Project/Area Number	10770123
Research Category	Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	Bacteriology (including Mycology)
Research Institution	Kyorin University
Principal Investigator	花輪智子杏林大学, 医学部, 助手 (80255405)
Project Period (FY)	1998 – 1999
Project Status	Completed (Fiscal Year 1999)
Budget Amount *help	¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000) Fiscal Year 1999: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000) Fiscal Year 1998: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Keywords	シャペロン / DnaK / 病原性 / ストレス蛋白質 / Listeria monocytogenes
Research Abstract	Salmonella typhimuriumやLegionella pneumophillaなどの細胞内寄生菌はマクロファージ貪食によりストレス蛋白質を誘発し,食細胞内ストレスに耐えながら増殖する。我々はListeria monocytogenesの主要なストレス蛋白質DnaKシャペロンマクロファージ貪食における役割を明らかにする目的で,dnaK周辺の遺伝子をクローニングおよび塩基配列の決定を行った。その結果,本菌のdnaKはhrcA,grpE,dnaJと共にオペロンを構成していた。このオペロンの転写開始点をprimar extension analysisによって決定したところ,hrcA,grpE,dnaJの上流に存在していた。Northern blot解析の結果から,このオペロンは少なくとも4つの転写ユニットによって転写されていることが明らかとなった。さらにdnaKの挿入変異株を作成し,マクロファージ内増殖能を測定した結果,親株と同等であったことから,本菌がであるDnaKシャペロンの介助なしにマクロファージで増殖することを明らかにした。このことは本菌がマクロファージ貪食後直ちに殺菌物質に富むファゴソームから細胞質にエスケープし,そこで増殖することによるものである。一方,dnaK変異株の貪食率は親株に比較して顕著に低下していた。dnaK変異株は鞭毛を形成しない。このマクロファージ貪食率の低下は鞭毛が合成されないことによるかについて明らかにするため,flagellinの遺伝子であるflaAの挿入変異株を作成し,マクロファージ貪食率を測定したところ,dnaK変異株とほぼどう程度であったことからdnaK変異によるマクロファージ貪食率の低下は鞭毛が存在しないためであることが明らかとなった。