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ジフテリア毒素のエンドソーム膜通過における前駆体の存在の解析

Research Project

Project/Area Number 10770127
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Bacteriology (including Mycology)
Research InstitutionKurume University

Principal Investigator

馬田 敏幸  久留米大学, 分子生命科学研究所, 助手 (30213482)

Project Period (FY) 1998 – 1999
Project Status Completed (Fiscal Year 1999)
Budget Amount *help
¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Fiscal Year 1999: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 1998: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Keywordsジフテリア毒素 / エンドソーム膜通過 / 前駆体 / clevage
Research Abstract

動物細胞に侵入したジフテリア毒素はより生じた28kDのフラグメントが、毒素のフラグメントAのエンドソーム膜通過すなわち細胞毒性発揮のための前駆体であるかどうかを調べるために、プロテアーゼによる切断を阻害する試薬を使って、28kDのフラグメントの生成が毒性発現に必須であるかどうかを検討した。
種々のプロテアーゼ阻害剤を使った28kDフラグメントの出現の阻害
使用するプロテアーゼ阻害剤
1.セリンプロテアーゼ阻害剤-PMSF,APMSF,chymostatin,aprotinin
2.システインプロテアーゼ阻害剤-pCMBS,pCMB,antipain,leupeptin,E-64,iodoacetic acid,iodoacetic amido
3.アスパラギン酸プロテアーゼ阻害剤-pepstatin
4.メタロプロテアーゼ阻害剤-o-Phenanthroline,EDTA,
上記阻害剤とあらかじめ処理したVeroH細胞に放射性ヨードでラベルしたDTを37℃で取り込ませた。細胞表面に存在するDTをプロナーゼ処理で除いた後、細胞を可溶化した。SDS-PAGE、オートラジオグラフィーを行ない28kD fragmentが存在するかどうかを調べた。その結果、上記の阻害剤では28kD fragmentの出現を押さえることはできなかった。またその時の細胞毒生はなんら影響を受けなかった。今後は阻害剤の細胞膜透過性を考慮しつつ、さらに他の阻害剤を使用して同様の実験を行なう。

Report

(2 results)
  • 1999 Annual Research Report
  • 1998 Annual Research Report
  • Research Products

    (3 results)

All Other

All Publications (3 results)

  • [Publications] Izumi Y,et al.: "A metalloprotease-disintegrin,MDC9/meltrin-gamma/ADAM9 and PKCdelta are involved in TPA-induced ectodomain shedding of membrane-anchored heparin-binding EGF-like growth factor." EMBO J.17(24). 7260-7272 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Umata T,et al.: "Diphtheria toxin translocation across endosome membranes: A novel cell permeabilization assay reveals new diphtheria toxin fragments in endocytic vesicles." J Biol Chem.273(14). 8351-8359 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report
  • [Publications] Mitamura T,et al.: "Structure-function analysis of the diphtheria toxin receptor toxin binding site by site-directed mutagenesis." J Biol Chem.272(43). 27084-27090 (1997)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report

URL: 

Published: 1998-04-01   Modified: 2016-04-21  

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