CTGリピート増幅を欠く筋強直性ジストロフィーにおける下流遺伝子発現異常の証明

• Project/Area Number: 10770358
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Pediatrics
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 津留 智彦 自治医科大学, 医学部, 助手 (90296111)
• Project Period (FY): 1998 – 1999
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1999)
• Budget Amount: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000); Fiscal Year 1999: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000); Fiscal Year 1998: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
• Keywords: 筋強直性ジストロフィー / 筋緊張性ジストロフィー / MtPK遺伝子 / MDPK遺伝子 / DMAHP遺伝子 / 発現異常 / 分子遺伝学

Research Abstract

筋強直性ジストロフィーの病態解明に関する以下の研究を行った。
1.CTGリピート伸長のない筋強直性ジストロフィー患者におけるMtPK遺伝子の異常解析。
CTGリピート伸長のない筋強直性ジストロフィー患者のリンパ球を分離し、細胞株を樹立した。
分離した患者リンパ球からgenomicDNAを抽出。PCR法によりMtPK遺伝子のエクソンの全配列を増幅。
鋳型として抽出したgenomicDNAを用い、酵素はTaKaRa Taq、primerはGenome Date BaseのMtPK遺伝子塩基配列から、12エクソンそれぞれを増幅するように決定して合成。シークエンス反応はTher mo Sequenase fluor escent labelled primer cycle sequencing kit with 7-deaza-dGTPを用いた。・・CTGリピート伸長のない筋強直性ジストロフィー患者のMtPK遺伝子のエクソン内に欠失、点変異の存在は検出されなかった。
2.筋強直性ジストロフィー患者におけるDMAHPの発現解析。
患者・非患者のリンパ球から抽出したRNAを用い、ノザン解析・RT-PCRを施行した。
・・RT-PCRでは発現の差はなかったが、ノザン解析で患者での発現低下が示唆された。
3.CTGリピート伸長のない患者におけるDMAHPの発現解析。
患者・非患者のリンパ球から抽出したRNAを用い、DMAHP遺伝子プローブを用いてノザン解析施行した。
・・CTGリピート伸長のない患者と非患者のリンパ球で発現の差を認めなかった。
以上から、CTGリピート伸長のない筋強直性ジストロフィー患者において、DMAHP遺伝子の発現異常の可能性が示された。今後は、エクソン以外の領域の解析と、筋組織における発現の解析を予定している。