| Budget Amount *help |
¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Fiscal Year 1999: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 1998: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
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| Research Abstract |
一過性前脳虚血後のスナネズミ海馬CA1錐体細胞の遅発性神経細胞死におけるアポトーシス関連遺伝子群の発現誘導機構に関して,転写因子NF-κBの活性化に注目して検討し,以下の結果を得た.
1.偽手術および虚血再灌流5,10,20,30,60,120分後の海馬CA1領域の核分画蛋白のFITC標識NF-κB結合配列DNAプローブ(FITC-5'-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3')によるgel shift assay法により,一過性前脳虚血再灌流5分後から始まり,再灌流20〜30分後をピークにした泳動遅延バンドを観察した.
2.偽手術および虚血再灌流5,10,20分後の海馬CAl領域の核分画蛋白の抗NF-κBp65抗体に対するWestem blot法により,NF-κBp65の核内移行は虚血再灌流5分後からみられ,虚血再灌流20分後まで亢進を認めた.
3.非虚血および虚血再灌流30分後の海馬前額断凍結切片上で免疫組織化学を行い,NF-κBの核内移行を形態学的に観察した.偽手術では海馬CAl錐体細胞の細胞質にNF-κBp50を認めるのに対して,虚血再灌流後30分後ではNF-κBp50は核内に認めた.
4.NF-κBと協力作用を有するHMG-1(Y)の発現が,一過性前脳虚血6-48時間後の海馬CAl錐体細胞に認めた.
5.虚血中低体温(34℃)により遅発性神経細胞死・TUNEL法陽性所見は著名に減弱した.
また,HMG-1(Y)の発現も減弱がみられた.
以上の結果より,一過性前脳虚血灌流後早期のNF-κBの核内移行,活性化が確認され,アポトーシス誘導機構におけるNF-κBの関与が強く示唆され,さらに,HMG-1(Y)の関与も示唆された.
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