| Project/Area Number |
10771303
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Field |
Biological pharmacy
|
|---|
| Research Institution | Showa University |
|---|
Principal Investigator |
桑田 浩 昭和大学, 薬学部, 助手 (80286864)
|
|---|
| Project Period (FY) |
1998 – 1999
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1999)
|
| Budget Amount *help |
¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Fiscal Year 1999: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1998: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
|
|---|
| Keywords | アラキドン酸代謝 / sPLA_2-IIA / 炎症性サイトカイン / リポキシゲナーゼ / シクロオキシゲナーゼ |
|---|
| Research Abstract |
sPLA_2-IIA発現誘導に関与するLOX分子種の同定
3Y1細胞由来のRNAを用いて、RT-PCR法により、内在的に発現しているLOX分子種の同定を行った。その結果、調べた分子種のうち、12/15-LOX遺伝子のみが極微量に発現していることが明らかとなった。そこで、12/15-LOX過剰発現3Y1細胞を作製し、炎症性サイトカイン刺激によるsPLA_2-IIA発現誘導に及ぼす効果について検討を行った。その結果、12/15-LOX過剰発現細胞では、対照細胞と比較して、著しくsPLA_2-IIA発現誘導が上昇していた。このとき培養上清に遊離されるPGE_2量を測定した結果、sPLA_2-IIA発現量の上昇に相関して上昇していた。また、本細胞におけるsPLA_2-IIA発現誘導及びPGE_2産生は、cPLA_2あるいはLOX阻害剤により顕著に抑制されたことから、sPLA_2-IIA発現誘導は、cPLA_2と12/15-LOXによって産生されるアラキドン酸代謝物によって調節されていることが示唆された。
ラットsPLA_2-IIAの5'プロモーター領域のクローニング
ラットsPLA_2-IIAの5'非翻訳領域の遺伝子配列をもとに、ラットゲノムライブラリーから、さらに上流のsPLA_2-IIAプロモーター領域のクローニングを行った。その結果、既知の領域を含む約3300bpのプロモー夕一配列が得られた。本配列中には、NF-kB、AP-1、CRE等の様々な転写因子結合領域が存在していた。
LOX代謝産物によるsPLA_2-IIA発現調節機構の解析
cPLA_2と12/15-LOXによって産生されるアラキドン酸代謝物によるsPLA_2-IIA発現調節に関与する転写因子結合領域を明らかとするため、得られたプロモーター領域中の配列(NF-kB、AP-1、CRE、PPRE)を用いて、ゲルシフトアッセイを行った。その結果、これらの結合配列によるゲルシフトは、対照細胞と12/15-LOX過剰発現細胞で同程度であった。以上の結果から、12/15-LOX産物により転写調節される領域は、別の場所にあることが示唆された。
|
