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ジーンノックアウト法を用いたニワトリヒストンデアセチラーゼの機能解析

Research Project

Project/Area Number 10780424
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Molecular biology
Research Institution宮崎医科大学

Principal Investigator

高見 恭成  宮崎医科大学, 医学部, 講師 (80236356)

Project Period (FY) 1998 – 1999
Project Status Completed (Fiscal Year 1999)
Budget Amount *help
¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Fiscal Year 1999: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 1998: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Keywordsヒストン / アセチル化
Research Abstract

クロマチン構造変化を介したDNAの機能発現調節にコアヒストンのアセチル化が関与する。我々はニワトリから3種のヒストンデアセチラーゼchHDAC-1,2,3をクローニングし,遣伝学的解析が比較的容易なニワトリBリンパ細胞株DT40を用いて、各chHDAC欠失変異株を作成することにより、これらの機能解析を試みている。
chHDAC-2欠損DT40変異株において,これまで以下に示す知見を得た。
1)本変異株の細胞内においてIgMの軽鎖および重鎖の量が親株のl0倍程度に増大している。また,培地中の分泌型IgMも2-3倍に増加している。
2)細胞膜上に発現している膜型IgMは滅少している。
3)膜型IgM重鎖のmRNA量が親株の約30%減少している。一方,分泌型IgM重鎖mRNA量は約8倍に増加している。IgM重鎖のmRNAの総量は約2.5倍になっている。
4)HDACの阻害剤であるトリコスタチンAでDT40株を処理することによって,IgM重鎖の総mRNAレベルの上昇,分泌型IgM重鎖mRNA量の増加およぴ膜型IgM重鎖mRNA量の滅少を引き起こすことができる。
上記の事実から,chHDAC-2がBリンパ球におけるIgM重鎖遺伝子の転写促進とIgMの膜型mRNAから分泌型mRNAへのスイッチングに深く関与していることが示された。
chHDAC-3はchHDAC-1,2と比べて、C-末端側の約50アミノ酸が欠如し、さらに、N-末端およびC-末端側でのホモロジーも低い。細胞増殖に必須である本酵素に関して、tet-inducible conditional homozygous mutantの作成に成功した。本変異株はtet添加後24時間でFLAG-tagged HDAC-3が検出出来なくなり、しばらくは正常に増殖するが、以後、増殖速度が遅くなり、死滅する。増殖にはchHDAC-3のN-末瑞側およびC-末端側の各々約150個のアミノ酸、核外輸送シグナル(NES)とデアセチラーゼ活性それ自体が必須である。本変異株はHDAC1,2の過剰発現により相補されないことから、HDAC3独自の細胞増殖調節機能が明らかになった。

Report

(2 results)
  • 1999 Annual Research Report
  • 1998 Annual Research Report
  • Research Products

    (2 results)

All Other

All Publications (2 results)

  • [Publications] Takami,Y.,Kikuchi,H.and Nakayama,T.: "Chicken histone deacetylase-2 controls the amount of the IgM H-chain at the steps of both transcription of its gene and alternative processing of its pre-mRNA in the DT40 cell line."J.Biol.Chem.. 274. 23977-23990 (1999)

    • Related Report
      1999 Annual Research Report
  • [Publications] Nakayama, T.and Takami, Y.: "Systematic analysis of the nature of histone genes in the chicken DT40 B cell line using gene targeting techniques" Trend in Comparative Biochem. & physiol.4. 211-217 (1998)

    • Related Report
      1998 Annual Research Report

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Published: 1998-04-01   Modified: 2016-04-21  

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