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C末端アミド化酵素がミエリンペプチドアミドの生合成に関与している可能性について

Research Project

Project/Area Number 10877023
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field General medical chemistry
Research InstitutionKurume University

Principal Investigator

野口 正人  久留米大学, 医学部, 教授 (10124611)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 高橋 研一  久留米大学, 医学部, 講師 (80250736)
緒方 英博  久留米大学, 医学部, 講師 (50108635)
Project Period (FY) 1998 – 1999
Project Status Completed (Fiscal Year 1999)
Budget Amount *help
¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 1999: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Keywordsアミド化 / ミエリンペプチドアミド / ミエリン塩基性タンパク / ラット脳 / 大脳
Research Abstract

生体内のほとんどのアミド化ペプチドは、peptidylglycine α-amidating monooxygenase(PAM)によって生成される。ところが、これとは異なる機構によるC端アミド化ペプチドが脳内に存在することが、近年Tatemotoらによって発見され、それぞれMPA-12,-14,-16と命名された。これらの生成機構には、その前駆体であるミエリン塩基性タンパクの構造から、3つの可能性が考えられる。すなわち、1)C端Tyr、AlaへのNH_2OH,NH_3を供与体とした付加反応またはアミノ転移反応、2)C端Leuの酸化的脱アルキル化(生理活性アミド化ペプチド生成と類似反応)、3)C端Tyr、AlaにGlyが付加後、PAMによってアミド化される(グリシンN-アシル転移酵素を介する脂肪酸アミド生成と類似反応)機構である。そこで、MPA-14前駆体アナログとして_<D->YKY,_<D->YKYL,_<D->YSKYLを合成し、これらをアミド化する酵素活性が、ラット脳に存在するかどうかを検討した。
それぞれの反応機構を考慮し、1)NH_2OH,NH_3,Asp,Gluなどの基質とピリドキサルリン酸,FAD,NADH,ATPなどの補酵素を添加した系、2)アスコルビン酸,NADH,FADH_2,グルタチオン,還元型プテリン,Cu^<2+>などのcofactor、もしくはNAD^+,NADP^+,FAD,FMNなどの酸化型補酵素を添加した系、3)GlyとCoAを添加した系に関して、ラット脳ホモジェネートおよび脳ミクロゾーム画分に関し、アミド化酵素活性の有無を系統的にスクリーニングした。その結果、どの系においても期待されるアミド化ペプチドの生成を認めなかった。以上の結果から、今後の検索のためには、前駆体アナログとすべき合成基質の種類をさらに検討し、用いるべき酵素標品の部分精製にも検討を加えていかなければならない。

Report

(2 results)
  • 1999 Annual Research Report
  • 1998 Annual Research Report
  • Research Products

    (29 results)

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All Publications (29 results)

  • [Publications] 野口 正人: "量子論の基礎(2)-ESR・NMRを理解するために-"久留米医学会雑誌. 61(7-10). 183-187 (1998)

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  • [Publications] Yoshiaki Omata: "Crystallization and preliminary X-ray diffraction studies on the water soluble form of rat heme oxygenase-1 in complex with heme."Acta Crystallographica Section D. D54. 1017-1019 (1998)

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  • [Publications] Kenichi Takahashi: "Kinetic-isotope effects of peptidylglycine α-hydroxylating mono-oxygenase reaction."Biochemical Journal. 336(1). 131-137 (1998)

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  • [Publications] Hiroshi Sakamoto: "Ferric α-hydroxyheme bound to heme oxygenase can be converted to verdoheme by dioxygen in the absence of added reducing equivalents."Journal of Biological Chemistry. 274. 18196-18200 (1999)

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  • [Publications] Kenichi Takahashi: "PEPTIDE SCIENCE 1998"The mechanism of peptidylglycine α-amidating reaction.. 510 (1999)

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  • [Publications] Kenichi Takahashi: "The mechanism of peptidylglycine α-amidating reaction." PEPTIDE SCIENCE 1998. (in press). (1999)

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  • [Publications] Hiroshi Sakamoto: "Study on the mechanism of verdoheme formation in the heme oxygenase reaction" 「生体機能における金属イオンの特異的作用の分子化学」 第3回ワークショップ. 86 (1998)

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  • [Publications] Kenichi Takahashi: "Deuterium kinetic-isotope effects in peptidylglycine α-amidating monooxygenase reaction." Journal of Inorganic Biochemistry. 67. 54 (1997)

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  • [Publications] 野口正人: "量子論の基礎(1) -ESR・NMRを理解するために" 久留米医学会雑誌. 60. 309-313 (1997)

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  • [Publications] 小俣義明: "Porphobilinogen Deaminase及びUroporphyrinogen III Synthase のcDNAクローニングとその発現" 生化学. 69(12). 1420 (1997)

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  • [Publications] 緒方英博: "ヒト心臓Peptidylglycine a-Amidating Monooxygenase(PAM)のcDNAクローニングと塩基配列の検討" 生化学. 69(7). 811 (1997)

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  • [Publications] 朝田慎也: "ヘム-ヘムオキシゲナーゼ複合体の結晶学的研究" 日本結晶学会講演要旨集. 166 (1997)

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  • [Publications] 緒方英博: "ヒトC末端アミド化酵素のクローニングと発現" 「生体機能における金属イオンの特異的作用の分子化学」第2回ワークショップ. 70 (1997)

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  • [Publications] 坂本 寛: "電子滴定によるヘムオキシゲナーゼ反応の中間過程の検討" 「生体機能における金属イオンの特異的作用の分子化学」第2回ワークショップ. 111 (1997)

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  • [Publications] 朝田慎也: "ヘム-ヘムオキシゲナーゼ複合体の結晶学的研究" 「生体機能における金属イオンの特異的作用の分子化学」第2回ワークショップ. 112 (1997)

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  • [Publications] Kenichi Takahashi: "Magunutude of intrinsic isotope effect in peptidylglycine α-amidating monooxygenase reaction." PRE-ICBIC-8 Okazaki Symposium. P-7 (1997)

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  • [Publications] Toshihiro Hidaka: "Cloning and expression of cDNA for soluble form of rat heme oxygenase-1." Kurume Medical Journal. 43. 313-324 (1996)

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  • [Publications] 野口正人: "医科生化学(竹重ら編)" (株)講談社サイエンティフィク, 352 (1999)

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  • [Publications] Yoshiaki Omata: "Oxygen Homeostasis and Its Dynamics(Y.Ishimura et.al.Eds.)" Springer-Verlag Tokyo, 620 (1998)

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Published: 1999-04-01   Modified: 2016-04-21  

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