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慢性関節リウマチ滑膜増殖に関わる新規蛋白質のcDNA-RDA法によるクローニング

Research Project

Project/Area Number 10877081
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 内科学一般
Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

尾崎 承一  京都大学, 大学院・医学研究科, 講師 (00231233)

Project Period (FY) 1998 – 1999
Project Status Completed (Fiscal Year 1999)
Budget Amount *help
¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 1999: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Keywords慢性関節リウマチ / 滑膜増殖 / サブトラクション / cDNA-RDA / PCR / 変形性関節症 / テスター / ドライバー / cDNA・RDA
Research Abstract

慢性関節リウマチ(RA)は、慢性破壊性増殖性滑膜炎を特徴とする自己免疫疾患であり、その滑膜増殖機序の全貌を解明しこれを制御することはRAの診断・治療法を確立する上で重要である。本研究はRAの病変局所で半自立的に増殖する滑膜に疾患特異的に発現している新規の蛋白を同定することを目的に、cDNA-RDA法というサブトラクション法を用いたものである。
Cdna-RDA法はサブトラクテイブハイブリダイゼーションとPCR法を基盤として、一方のCdna群(テスター側)に存在し、他方(ドライバー側)にないCdna断片を動的に効率よく濃縮する手法である。本研究は、テスター側をRA滑膜・ドライバー側を非増殖性滑膜炎の代表である変形性関節症とすることによりRA滑膜に特異的に発現するCdna断片をクローニング・解析し、滑膜増殖機構を解明する計画である。本年度までに以下の研究を進めた。
1)抗CD3抗体で活性化したCD4+T細胞クローンと無刺激の同細胞との間でCdna-RDA法を行ないcDNA断片をクローニング、48クローンを得た。このうち20クローンは続くNothern Blottingでその発現特異性を確認できた。これらのシークエンスにより、18クローンは近年Fas Ligandの発現誘導に関与することがあきらかとなった蛋白nur77であった。以上、本手法は発現に差のある蛋白を効果的にクローニングしうることを確認した。
2)RA患者の手術(滑膜切除術および人工関節置換術)時に得られた滑膜組織からmRNAを採取しcDNAを作成、テスターのソースとした。変形性関節症の手術時に得られた滑膜組織から同様にドライバーのソースを得た。HLA蛋白などの濃縮をさけるため、それぞれ複数の患者のcDNAを混合したものからテスター・ドライバーを作成してcDNA-RDA法を施工し、クローニングを進める予定である。

Report

(2 results)
  • 1999 Annual Research Report
  • 1998 Annual Research Report
  • Research Products

    (15 results)

All Other

All Publications (15 results)

  • [Publications] Sobajima J.,Ozaki S.,et al.: "Prevalence and characterization of P-ANCA directed against HMG1 and HMG2 in ulcerative colitis"Clin.Exp.Immunol.. 111・2. 402-407 (1998)

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      1999 Annual Research Report
  • [Publications] Uesugi H.,Ozaki S.,t al.: "Prevalence and characterization of novel P-ANCA, antibodies to the high mobility group non-histone chrmosomal proteins HMG1 and HMG2, in systemic rheumatic diseases."J.Rheumatol.. 25. 703-709 (1998)

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      1999 Annual Research Report
  • [Publications] Tanaka M.,Ozaki S.,et al.: "Cloning of follistatin-related protein (FRP) as a novel autoantigen in systemic rheumatic diseases"Int.Immunol.. 10・9. 1305-1314 (1998)

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      1999 Annual Research Report
  • [Publications] Sobajima J.,Ozaki S.,et al.: "High mobility group non-histone chromosomal proteins HMG1 and HMG2 are significant target antigens of perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antovodies in antibodies in autoimmune hepatitis"Gut. 44・6. 867-873 (1999)

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      1999 Annual Research Report
  • [Publications] Shinkura N.,Ozaki S.,et al.: "Autoantibodies to FK506 binding protein 12 (FKBP12) in autoimmune diseases"Autoimmunity. 29. 159-170 (1999)

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      1999 Annual Research Report
  • [Publications] Ochiai K.,Ozaki S.,et al: "Genetic regulation of anti-erythrocyte autoantibodies and splenomegaly in autoimmune hemolytic anemia-prone New Zealand Black mice."Int.Immunol.. 12・1. 1-8 (2000)

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      1999 Annual Research Report
  • [Publications] 尾崎承一(共著): "わかりやすい内科学"文光堂(東京)、井村裕夫・主幹編集. 1178 (1999)

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      1999 Annual Research Report
  • [Publications] 尾崎承一(共著): "内科学"文光堂(東京)、黒川清・松澤佑次・主幹編集. 2233 (1999)

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  • [Publications] Sobajima J.,OzakiS.,et al.: "Prevalence and characterization of P-ANCA directed against HMG1 and HMG2 in ulcerative colitis." Clin.Exp.Immunol.111・2. 402-407 (1998)

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  • [Publications] Uesugi H.,OzakiS.,et al.: "Prevalence and characterization of P-ANCA antibodies to the high mobility group non-histone chromosomal proteins HMG1 and HMG2,in systemic rheumatic diseases." J.Rheumatol.25. 703-709 (1998)

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  • [Publications] Tnaka M.,OzakiS.,et al.: "Cloning of follistatin-related protein(FRP)as a novel autoantigen in systemic rheumatic diseases." Int.Immunol.10・9. 1305-1314 (1998)

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  • [Publications] Shinkura N.,Ozaki S.,et al.: "Autoantibodies to FK506 binding protein 12(FKBP12)in autoimmune diseases." Autoimmunity. (発表予定).

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  • [Publications] Sobajima J.,OzakiS.,et al.: "High mobility group non-histone chromosomal proteins HMG1 and HMG2 are significant target antigens of perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibodies in autoinnune hepatitis." Gut. (発表予定).

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  • [Publications] 尾崎承一(共著): "自己免疫でおこる難治性疾患-実地医家のための最新情報-" 医薬ジャーナル社(東京)、坂根剛・編, 267

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  • [Publications] 尾崎承一(共著): "外来診療のすべて(改訂第2版)" メディカルビュー社(大阪)、高久史麿・総監修, 911

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      1998 Annual Research Report

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Published: 1999-04-01   Modified: 2016-04-21  

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