| Project/Area Number |
10877301
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Field |
Functional basic dentistry
|
|---|
| Research Institution | Iwate Medical University |
|---|
Principal Investigator |
永井 雅純 岩手医科大学, 歯学部, 助手 (00217960)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
客本 斉子 岩手医科大学, 歯学部, 講師 (90118274)
|
|---|
| Project Period (FY) |
1998 – 2000
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2000)
|
| Budget Amount *help |
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2000: ¥300,000 (Direct Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 1999: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 1998: ¥300,000 (Direct Cost: ¥300,000)
|
|---|
| Keywords | ヒト歯胚 / 遺伝子発現 / 形態形成 / tooth germ / gene expression / serial analysis of gene express / 遺伝子ライブラリー / 遺伝子クローニング |
|---|
| Research Abstract |
ヒト歯胚完全長cDNAライブラリーの構築
SMART法(Biotechniques 26:542-8)の原理に従い、DNase処理したヒト鐘状期歯胚poly-A RNAを鋳型としセンス/アンチセンス両鎖の5'-末端にアンカー配列を付加したcDNAライブラリーを構築した。但し、原法ではセンス/アンチセンス両鎖の末端に共通のアンカー配列を付加するのに対し、本研究においてはセンス鎖末端にはAAGCAGTGGTAACAACGCAGAGTをアンチセンス鎖末端にはGCTGATGGCGATGAATGAACAを付加することにより、5'-RACE/3'-RACEの特異性の改善を図った。つぎに両アンカー配列をプライマーとしたPCRでds cDNAを増幅したのち、ベクターに組み込んでライブラリーを構築した。
ヒト歯胚特異的遺伝子の同定
平成11年度にSAGE法で得たtagシークエンスの陽性クローンをライブラリーよりコロニーハイブリダイゼーション法により選択しtagシークエンスと5'-アンカーあるいは3'-アンカーを用いてRACE cDNA cloneを増幅し、ベクターにサブクローニングしたのち配列を決定した。
これまで、3つのクローンの遺伝子配列を決定したがホロモジー検索の結果、いづれもイントロンを含む既知のゲノム配列に一致していた。この結果はDNase処理したpoly-A RNAをcDNAの鋳型とした事実と矛盾するためその原因を追求している。
|
