| Project/Area Number |
10877385
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Field |
応用薬理学・医療系薬学
|
|---|
| Research Institution | Tohoku University |
|---|
Principal Investigator |
柳澤 輝行 東北大学, 医学部, 教授 (90133941)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
末永 智一 東北大学, 大学院工学研究科, 助教授 (70173797)
村上 学 東北大学, 医学部, 助手 (80302090)
助川 淳 東北大学, 医学部, 講師 (00171736)
布木 和夫 東北大学, 医学部, 講師 (10172743)
|
|---|
| Project Period (FY) |
1998
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1998)
|
| Budget Amount *help |
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 1998: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
|
|---|
| Keywords | 電位依存性カルシウムチャネル / β_3サブユニット / Northern解析 / 欠損マウス / 血管平滑筋 / 分子薬理学 |
|---|
| Research Abstract |
電位依存性カルシウム(Ca^<2+>)チャネルは血管平滑筋の収縮に必要なCa^<2+>流入の主な経路である。このチャネルはα1,α2/δ,β,γのサブユニットから構成され、α1がCa^<2+>イオンの通る主サブユニットである。一方βサブユニットは細胞膜の内側に存在し、α1サブユニットの膜における局在、チャネル活性の修飾などに関係している。現在まで、4つのβサブユニットが報告されているが、我々は遺伝子ターゲッティング法を用いて血管平滑筋における電位依存性Ca^<2+>チャネルの主なβサブユニットと考えられているβ3サブユニットの欠損マウスモデルを作製し、このβ3サブユニットの機能解析を試みた。
まず、WISHにて、β3サブユニットの大体の発現を見た。10.5日齢マウス胎児において、かなり広くこの遺伝子が発現していることを確認した。特に中枢神経系、および体節に強く発現していることが明らかとなった。
Northern解析でにおいては、β1サブユニットでは骨格筋にて強い発現がみられた。β2サブユニットでは心筋および大動脈にて強い発現がみられた。β3サブユニットでは脳、および大動脈、トラキア、肺にて強い発現がみられた。現在のところ平滑筋では、α1c-bサブユニットとβ3サブユニットが電位依存性カルシウム(Ca^<2+>)チャネルを構成していると考えられている。
次に遺伝子ターゲッティング法を用いてβ3サブユニット欠損マウスを作製した。
マウスのSouthern解析では、コントロールでは、12K,ミユータントでは8Kのバンドが見られた。脳のNorthern解析では、ミユータントマウスにてβ3サブユニットの発現がないことを確認した。また、Western解析にて、β3サブユニットがないことを蛋白レベルにても確認した。
|
