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ヒト腫瘍免疫レパトアのプロテオミクスプロフィーリング

Research Project

Project/Area Number 10F00121
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section外国
Research Field Human pathology
Research InstitutionSapporo Medical University

Principal Investigator

佐藤 昇志  札幌医科大学, 医学部, 教授

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) コーチン ビタリー  札幌医科大学, 医学部, 外国人特別研究員
VITALY Kochin  札幌医科大学, 医学部, 外国人特別研究員
Project Period (FY) 2010 – 2012
Project Status Completed (Fiscal Year 2012)
Budget Amount *help
¥2,900,000 (Direct Cost: ¥2,900,000)
Fiscal Year 2012: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2011: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 2010: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
KeywordsMHCクラスI / 抗原提示 / 腫瘍抗原ペプチド / 抗原掲示 / ERAAP
Research Abstract

CD8+T細胞は標的細胞に提示されるペプチド/MHCクラスI複合体を特異的に認識し、これを傷害する。提示される抗原ペプチドは内在性に発現した蛋白に由来する分解産物であるが、これらのペプチドがどのようなメカニズムでつくられ、またどのようなペプチド群(レパートリー)を形成しているのかは未だに不明な点が多い。本プロジェクトではマススペクトロメトリーを利用し実際に提示されてくるMHCクラスIペプチド群の網羅的解析を行う。
当該年度では、
1)HLA-A24特異抗体産生ハイブリドーマよりモノクローナル抗体を精製濃縮し、ペプチド/HLAクラスI複合体を回収するための親和カラムを作成した。
2)約1.5×10^9個のHLA-A24発現するヒト大腸癌細胞株(SW480,Colo320,HCT-15/b2m)より細胞抽出液を準備し、親和カラムでペプチド/HLAクラスI複合体を回収した後、弱酸で結合ペプチドを遊離回収した。
3)分子量3kDaフィルターを通した遊離ペプチドをRP-HPLCによりフラクション化し、それぞれのサンプルをマススペクトロメトリー(ABI/4800plusMALDI_TOF/TOF)により網羅的にシークエンス解析した。
4)SW480,Colo320,HCT-15/b2mからは重複のない186個、コントロールとして用いたHLA-A24発現しないヒト大腸癌細胞株HCT-116からは5個のペプチド配列を検出した(2013年3月現在)。実験の再現性は約80%程度であり、また既知のHLA-A24結合モチーフを利用した親和性解析では前者のペプチド群が有意に高く、後者はいずれもHLA-A24結合モチーフを欠損していた。この結果は、本システムにより高い精度でがん細胞のHLA-A24に提示されるナチュラルペプチドレパートリーを網羅的解析可能であることを示している。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

交付申請書に記載した研究実施計画通りにプロジェクトが進行している。

Strategy for Future Research Activity

ヒト腫瘍細胞に提示されるペプチド・MHCクラスIレパートリーを網羅的に解析するためのシステムを日本人に最も多い遺伝子多型であるHLA-A24において樹立し、本プロジェクトにおける目標を達成した。今後はこのシステムを応用し、CD8+T細胞応答を惹起する免疫原性を有したナチュラル抗原ペプチドのスクリーニングを行う予定である。

Report

(3 results)
  • 2012 Annual Research Report
  • 2011 Annual Research Report
  • 2010 Annual Research Report
  • Research Products

    (4 results)

All 2012 2011

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] Efficiency of G2/M-related tumor-associated antigen-targeting cancer immunotherapy depends on antigen expression in the cancer stem-like population2012

    • Author(s)
      Takashi Mori, Satoshi Nishizawa, Yoshihiko Hirohashi, Toshihiko Torigoe, Yasuaki Tamura, Akari Takahashi, Vitaly Kochin, Reona Fujii, Kondo Toru, Mark I. Greene, Isao Hara, Noriyuki Sato
    • Journal Title

      Experimental and Molecular Pathology

      Volume: 92 Issue: 1 Pages: 27-32

    • DOI

      10.1016/j.yexmp.2011.09.016

    • Related Report
      2012 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Cytotoxic T lymphocytes.Sniping cancer stem cells2012

    • Author(s)
      Yoshihiko Hirohashi, Toshihiko Torigoe, Satoko Inoda, Rena Morita, Vitaly Kochin, Noriyuki Sato
    • Journal Title

      Oncoimmunology

      Volume: 1 Issue: 1 Pages: 123-125

    • DOI

      10.4161/onci.1.1.18075

    • Related Report
      2012 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] The role of phosphopeptides presented on MHC class I2011

    • Author(s)
      Vitaly Kochin
    • Organizer
      日本病理学会
    • Place of Presentation
      松本市
    • Year and Date
      2011-08-05
    • Related Report
      2011 Annual Research Report
  • [Presentation] The role of phosphopeptides presented on MHC class I2011

    • Author(s)
      Vitaly Kochin
    • Organizer
      日本癌学会
    • Place of Presentation
      名古屋市
    • Related Report
      2011 Annual Research Report

URL: 

Published: 2010-12-03   Modified: 2024-03-26  

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