トリプルターゲティングによるがん細胞に特異的な核内転写抑制システムの構築

• Project/Area Number: 11132256
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 原島 秀吉 北海道大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (00183567)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮内 正二 北海道大学, 大学院・薬学研究科, 助教授 (30202352) ; 大熊 芳明 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (70192515) ; 篠原 康雄 徳島大学, 薬学部, 助教授 (60226157)
• Project Period (FY): 1999
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1999)
• Budget Amount: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000); Fiscal Year 1999: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
• Keywords: 薬物送達システム / リポソーム / ターゲティング / エンドサイトーシス

Research Abstract

平成11年度は,標的化リポソームに関する検討,核内の特異的転写阻害に関する検討,核内送達量の定量化に関する検討を行った.
(1)トランスフェリン(Tf)をリガンドとした癌細胞標的化リポソームによる抗腫瘍効果:血中滞留性リポソームのPEGの先端にTfを結合させて,がん細胞を選択的に認識する標的化リポソームを調製した.このリポソームにドキソルビシンを封入し,Tf-receptorを介して細胞内へ抗癌剤の導入させた.その結果,ドキソルビシンに耐性である癌細胞に対しても有効となり,Tf-receptorを標的とした細胞内送達の有用性を示すことができた.
(2)転写阻害リガンドの合成とin vitro系におけるTFIIHの転写因子阻害実験:RNAポリメラーゼIIの最大サブユニットRPB1(分子量約200kDa)のC末端にあるCTD(C-Terminal Domain)とよばれる繰り返し配列に対するペプチドを合成した.精製した五つの基本転写因子とRNAポリメラーゼIIからなる再構築系にて転写阻害活性について検討したところ,IC50は約1mMであり,さらに特異性の高いリガンドについて現在検討中である.
(3)核内送達遺伝子の定量法の確立:本年度はサザンブロッティング法に基づいた核内プラスミドの定量法を新たに確立した.その結果,PCR法よりも正確に核内プラスミド量の定量が可能となった.

Research Products

• [Publications] H.Harashima, et al.: "Optimization of Antitumor Effect of Liposomaly Encapsulated Doxorubicin Based on Simulations by Pharmacokinetic/Pharmacodynamic Modeling"J.Cont.Rel.. 61. 93-106 (1999)
• [Publications] M.Tsuchihashi, et al.: "Development of a PK/PD-Simulation System of Doxorubicin in Long Circulating Liposomes in Mice with Peritoneal P388"J.Cont.Rel.. 61. 9-19 (1999)
• [Publications] H.Harashima, et al.: "PK/PD-modeling of antitumor effect of cancer agents using liposomes as a drug carrier"Adv.Drug Del.Rev.. 40. 39-61 (1999)
• [Publications] Y.Shinohara, et al.: "Expression of bovine heart mitochondrial ADP/ATP carrier in yeast mitochondria : Significantly enhanced expression by replacement of the N-terminal region of the bovine carrier by the corresponding regious of the yeast carrier"Biochim.Biophys.Acta. 1409. 113-124 (1999)
• [Publications] Y.Shinohara, et al.: "Functional expression of the tandem-repeated homodimer of the mitochondrial ADP/ATP carrier in Saccharomyces cerevisiae"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 262. 726-730 (1999)
• [Publications] Y.Ohkuma: "Function and structural biology of general transcription factors and RNA polymerase II in eukaryotes"Tanpakushitsu Kakkusan Koso. 44. 438-456 (1999)