| Project/Area Number |
11149221
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
荒木 喜美 熊本大学, 医学部, 助手 (90211705)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
荒木 正健 熊本大学, 遺伝子実験施設, 助教授 (80271609)
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| Project Period (FY) |
1999
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1999)
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| Budget Amount *help |
¥2,700,000 (Direct Cost: ¥2,700,000)
Fiscal Year 1999: ¥2,700,000 (Direct Cost: ¥2,700,000)
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| Keywords | ES細胞 / 遺伝子トラップ / 挿入変異マウス / Cre / loxシステム / 遺伝子発現 |
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| Research Abstract |
現在のトラップベクターpU-Hachiをさらに改良するため、loxPとは組換えを起こさないペーサー部分に変異を持つlox配列も併用した新しいトラップベクターpU-17を完成した。このベクターではレポーター遺伝子入れ替えの際、5'側の部分との融合遺伝子を作ることも、3'側の部分と融合遺伝子を作ることも出来、pU-Hachiより広い応用範囲を持つ。
pU-Hachiを用いて109のトラップクローンを単離した。サザンブロットでトラップベクターの挿入パターンを調べたところ、約7割が1コピーのみの挿入であり、この1コピーのみ挿入のクローンについて、未分化及び胚様体でのβ-geo遺伝子の発現を調べ、パターンにより分類を行った。その結果、ほぼ全てのクローンでいずれかの時期に染色がみられ、このベクターでのトラップ効率は大変良いことがわかった。約5割のクローンは分化後に発現の上昇を示し、分化後に発現が下降するものは非常に少なかった。pU-17では、現在までに89クローンを樹立した。今後、これらのクローンの解析を同様にして進めていく予定である。
次に、puU-Hachiトラップクローンを用いての遺伝子置換の効率の検討を行ったところ、6-8割にも達する高い効率で置換に成功した。さらに、置換された遺伝子がもとのレポーター遺伝子と同様の発現を示すことを、胚様体で特異的発現パターンを示すクローンを用いて証明した。
pU-Hachiなどで得られたクローンから現在までに26の変異マウスラインを樹立した。それぞれのラインでのX-Gal染色パターン解析も行っているが、胎生期では全身が、成体では脳と心臓(特に心房)が染色されるものが多いようである。現在集めたデータをHTML文書及びJPEG形式の写真として、ネットスケープ等のブラウザソフトで見れる形に編集している所である。
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