選択的スプライシングのリン酸化制御機構

Research Project

Project/Area Number	11155208
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Institution	Tokyo Medical and Dental University
Principal Investigator	萩原正敏東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (10208423)
Project Period (FY)	1999
Project Status	Completed (Fiscal Year 1999)
Budget Amount *help	¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000) Fiscal Year 1999: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
Keywords	SRPK / SF2 / ASF / splicing
Research Abstract	我々はSRPK1と分裂酵母の細胞周期制御遺伝子Dsk1の高い相同性に着目して、マウス脳mRNAより新規のSR蛋白リン酸化酵素をクローニングし、SRPK2と名付けた。大腸菌で発現させたSRPK1とSRPK2を用いて、GST-SF2Pull-Down Kinase Assayを行ったところ、SF2/ASFに結合してリン酸化活性を示した。実際に細胞内でもSF2/ASFとSRPKが複合体を形成しているかどうか調べるためCOS7細胞にSF2/ASFとSRPKを共発現させ、共沈実験およびkinase-assayを行ったところ、SF2/ASFとSRPKは細胞内においても結合していることが確認できた。またSF2/ASFのdeletion mutantを用いた解析により、このSF2/SRPK複合体の形成にはRSドメインが必須で、その結合部位はSRPKによるリン酸化部位と一致することが確認できた。さらにSF2/ASFのリン酸化状態により結合能に差がみられるかを調べたところ、リン酸化されていないSF2/ASFとSRPKは複合体を形成するが、リン酸化されたSF2/ASFとSRPKはもはや結合しなかった。リン酸化活性化能をもたないSRPK2^<K108R>をHeLa細胞内で発現させたところ、核内でspeckled patternを示していたSF2/ASFは核外に移行した。この結果よりSF2/ASFの細胞内局在は、SRPKによって制御されている可能性があると考えられる。