| Project/Area Number |
11760047
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Plant nutrition/Soil science
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
白石 斉聖 神戸大学, 農学部, 助手 (00304121)
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| Project Period (FY) |
1999 – 2000
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2000)
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| Budget Amount *help |
¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
Fiscal Year 2000: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 1999: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
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| Keywords | 硝酸還元酵素 / シスエレメント / DNA結合タンパク質 / cDNAクローニング |
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| Research Abstract |
1,NRゲノム遺伝子上のcis-acting DNA elementの解析
ホウレンソウNRゲノム遺伝子上の"AGCTA"配列について、硝酸イオンによるNR誘導に必要な"AGCTA"配列は-261〜-265の領域(NR-2)であることを同定した。またこの領域の直前にあるAT Rich領域も遺伝子発現に不可欠であることを明らかとした。
2,硝酸誘導に関与するDNA結合タンパク質の検索
NR-2領域の"AGCTA"配列に特異的に結合するDNA結合タンパク質の存在を明らかとした。
3,DNA結合タンパク質のcDNAクローニング
2で述べたDNA結合タンパク質のcDNAクローニングを行った。酵母One-hybrid法を用いて約30万個の組換え体から10個のポジティブクローンを得た。得られたクローンについて塩基配列を決定し、データベース検索を行った。ホモロジー検索の結果、既知のDNA結合タンパク質は見られなかったが、1つのクローンが未知のタンパク質をコードしていることが明らかとなった。このクローンからタンパク質を発現させ、AGTCA配列を含むオリゴDNAを用いてゲルシフトアッセイを行った結果、このタンパク質がAGTCA配列を特異的に認識していることが明らかとなった。
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