ハブ毒中のアポトーシス誘導活性成分の同定及びその作用機序の解明
| Project/Area Number |
11760079
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Research Field |
応用微生物学・応用生物化学
|
|---|
| Research Institution | Sojo University |
|---|
Principal Investigator |
上田 直子 (小田 直子) 崇城大学, 工学部, 助教授 (70211828)
|
|---|
| Project Period (FY) |
1999 – 2000
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2000)
|
| Budget Amount *help |
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 2000: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 1999: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
|
|---|
| Keywords | アポトーシス / ホスホリパーゼA_2 / ハブ毒 / カスパーゼ非依存 |
|---|
| Research Abstract |
ハブ毒はタンパク質の宝庫であり,筋壊死,出血,浮腫等の多様な生理作用をもつ。筋壊死に関連してハブ毒中のアポトーシス誘導成分に注目した。ハブ粗毒に複数の成分にアポトーシス誘導活性が存在することを明らかとした。本研究では特に,活性に必須のCa^<2+>結合部位49位AspがLysに置換した低活性型ホスホリパーゼA_2アイソザイム([Lys^<49>]PLA_2)について報告する。
1.[Lys^<49>]PLA_2のアポトーシス誘導活性の解析
[Lys^<49>]PLA_2は,HL-60細胞に対し濃度及び反応時間に依存的に作用し,アポトーシス小体,クロマチンの凝縮,核断片化を確認した。興味深いことに高酵素活性[Asp^<49>]PLA_2は細胞毒性を全く示さなかった。
2.[Lys^<49>]PLA_2のアポトーシス誘導活性と酵素活性の関係
酵素活性とアポトーシス誘導の関係をより明確にするため,p-ブロモフェナシルブロミドで不活化した酵素を調整し,そのアポトーシス誘導の解析を行ったところ,[Lys^<49>]PLA_2と同程度のアポトーシス誘導を示した。[Lys^<49>]PLA_2によるアポトーシス誘導活性はその酵素活性とは独立したものであると結論した。
3.[Lys^<49>]PLA_2アポトーシス誘導とカスパーゼ酵素系の関係
アポトーシス実行過程に代表的な酵素群であるカスパーゼ3及び6の経路が[Lys^<49>]PLA_2のアポトーシス誘導活性に関与しているか調べた。カスパーゼ阻害剤は[Lys^<49>]PLA_2のHL-60細胞死に阻害効果を示さなかった。またカスパーゼ3及び6の細胞内酵素活性もアポトーシス非誘導と何ら変化しなかった。さらにカスパーゼ酵素群の基質Poly(ADP-ribose)ploymeraseも分解されなかった。これらの結果より,[Lys^<49>]PLA_2のHL-60細胞に対するアポトーシス誘導はカスパーゼ3及び6に非依存的であると結論付けた。
4.[Lys^<49>]PLA_2の細胞内作用機序について
[Lys^<49>]PLA_2の細胞内作用部位を明らかとするため,それに特異的な抗体を作製し,共焦点レーザー顕微鏡で解析した。さらに細胞粗分画成分によるビアコア(生体物質相互作用解析装置)でも解析した結果,細胞膜に点々と局在して作用していることが明らかとなった。
|
Report
(2 results)
Research Products
(1 results)
