| Project/Area Number |
11770124
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Experimental pathology
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
橋口 明典 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (50276218)
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| Project Period (FY) |
1999 – 2000
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2000)
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| Budget Amount *help |
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2000: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 1999: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
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| Keywords | ストレス蛋白 / HSP90 / 抗がん剤 / 細胞増殖 / ストレス応答 |
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| Research Abstract |
1.HSP90の細胞増殖、熱ストレス応答における機能をHSP90との会合分子の点から、詳細にする目的でmycタグを付加したHSP90をNIH3T3細胞に遺伝子導入し、以下の知見を得た。
1)サイクリン遺伝子の発現をRNA protection assayにて検討したところcyclinA_2およびcyclinD_3の発現低下がみられた。
2)NIH3T3-HSPは対照と比較して、geldanamycin、doxorubicinによる細胞死の抑制がみられた。
3)NIH3T3-HSPは対照と比較して、熱ストレスに対する耐性の低下がみられた。
4)NIH3T3-HSPにおける免疫沈降法で、導入遺伝子産物とHSF-1の会合を認めた。
5)HSF-1の細胞内局在は、コントロールでみられる熱ショック後核内移行が、NIH3T3-HSPでは抑制された。
2.HSP90と各種抗がん剤との会合をリアルタイム分子間相互作用解析装置BIACORE2000を用いて検討した。
精製されたヒスチジンタグ付加HSP90をNTA tip上に固相化し、抗がん剤とHSP90との会合をBIACORE2000にて検討したところ、doxorubicinが濃度依存性にHSP90と会合することが明らかとなった。
以上の結果を、第89回日本病理学会総会(2000,大阪)、第59回日本癌学会総会(2000,横浜)、第23回日本分子生物学会総会(2000,神戸)、Cold Spring Harbor Laboratory Meeting,"Molecular chaperones ＆ the heat shock response"(2000,New York)にてそれぞれ発表した。
3.HSP90変異体を導入したトランスジェニックマウスを作成し、2ラインを得た。
現在これを解析中である。
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