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アレルギー疾患と腫瘍の診断治療に結びつく新規セリンプロテアーゼの分子生物学的解析

Research Project

Project/Area Number 11770244
Research Category

Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field 内科学一般
Research InstitutionThe University of Tokushima

Principal Investigator

井上 雅広  徳島大学, 分子酵素学研究センター, 助手 (00232562)

Project Period (FY) 1999 – 2000
Project Status Completed (Fiscal Year 2000)
Budget Amount *help
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2000: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 1999: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
Keywords分子シャペロン / セリン性プロテアーゼ / 精巣 / esp-1 / 癌 / プロモーター / 転写因子 / ノックアウトマウス / エンハンサー / シャペロン
Research Abstract

リコンビナントESP-1タンパクの発現を、S2,Cos7,HEK293、HeLa細胞などを用い、こころみた。シグナルペプチドをrat trypsinogenに変えて分泌しやすくする。C末端にFLAG-Tag,Immunoglobulin Fc Tag,Myc-Tagなどのタッグをつける。enterokinase、dipeptidyl-peptidase(Tryptase)の切断部位をIVGG配列の直前に導入する。など、様々な工夫をこらしたが、HeLa細胞の系以外では、すべてinc1usion bodyを形成した。HeLa細胞の系においても活性のあるものは、得ることができなかった。このような、タンパクの発現には、特異的な分子シャペロンの存在が、想定されることより独自に分子シャペロンをクローニングする方法を開発した。しかし、cDNAライブラリーの質的な問題によりまだ分子の同定にはいたっていない。esp-1の腫瘍細胞における発現頻度が、正常組織より低いという結果をさらに卵巣ガンcell line15種類及び肺ガンcell line10種類において検討した。わずか、3種類にしかRT-PCRのレベルでesp-1のmRNAは発現していないことが明らかになった。これにより、esp-1は癌化すると発現が抑制される遺伝子であることが予想される。依然esp-1の機能が、不明であることより精巣で特に発現が高いこの遺伝子をマウスで遺伝子ノックアウトすることに着手した。現在キメラマウスの樹立に成功しており、解析の準備中である。

Report

(2 results)
  • 2000 Annual Research Report
  • 1999 Annual Research Report
  • Research Products

    (4 results)

All Other

All Publications (4 results)

  • [Publications] Hiroshi Mori: "14-3-3 Associates with a translational control factor FKBP12-rapamycin-associated protein in T cells after stimulation by pervanadate"FEBS Lett.. 467(1). 61-64 (2000)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Dong Ryoug Kim: "Cloning and expression of novel mosaic serine proteases with and without a transmembrane domain from human lung"Biochimica et Biophysica Acta. (in press). (2001)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Masahiro Inoue: "Structual analysis of esp-1 gene (PRSS 21)"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 266(2). 564-568 (1999)

    • Related Report
      1999 Annual Research Report
  • [Publications] Hiroshi Mori: "14-3-3 Associates with a translational control factor FKBP 12-rapamycin-associated protein in T cells after stimulation by pervanadate"FEBS Lett.. 467(1). 62-64 (2000)

    • Related Report
      1999 Annual Research Report

URL: 

Published: 1999-04-01   Modified: 2016-04-21  

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