虚血後の中枢神経細胞のアポトーシスに対するMPPの遺伝子治療への応用

• Project/Area Number: 11770859
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Anesthesiology/Resuscitation studies
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 辻田 俊也 長崎大学, 医学部・附属病院, 助手 (40244066)
• Project Period (FY): 1999 – 2000
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2000)
• Budget Amount: ¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000); Fiscal Year 2000: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 1999: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
• Keywords: 低酸素 / 低体温 / 神経細胞 / アポトーシス / Fas / SAPK

Research Abstract

中枢神経細胞は部位により性質が異なるので、神経細胞の性質を持ちアポトーシス誘導が容易な、ラット褐色細胞腫、PC-12 ccll lineを用いた。70%confluentの培養条件で、血清を極低容量にする前処置後、37°C(正常体温)、33℃(低体温)の2条件で、この細胞を1%酸素(低酸素)にそれぞれ0、12、24、36、48時間暴露させた。
1)Hoechst33342とPropidium iodideで2重染色し、蛍光顕微鏡を用いて、それぞれ少なくとも1000個以上の細胞で、アポトーシス細胞、ネクローシス細胞、正常細胞の出現率をカウントした。
2)細胞をバッファーで融解させ、細胞内の蛋白を抽出した。電気泳動後、ウエスタンブロッティングを行った。Fas蛋白、SAPKの発現量をNIH image densitometry法で観察、測定した。
〈結果〉
l)いずれの温度でも経時的にアポトーシス細胞の出現率が増加し、48時間後に最大となったが、33℃ではその割合は37℃に比べ低かった。
2)いずれの温度でもFas蛋白の発現量は増加し、12時間後に最大となった。以後減少したが、33℃では増加の割合は37℃に比べ低かった。SAPKの発現量には有為差がみられなかった。
〈考察〉
低体温は、低酸素によるアポトーシス誘導を減弱させる。これにはFas蛋白誘導減少が関与している。なぜ低体温でFas蛋白誘導減少がおこるかは今後解明しなければならない。
これらの結果を今年のアメリカ麻酔学会に応募する。