| Project/Area Number |
11770953
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Obstetrics and gynecology
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| Research Institution | Saitama Medical University |
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Principal Investigator |
大久保 貴司 埼玉医科大学, 医学部, 助手 (40271241)
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| Project Period (FY) |
1999 – 2000
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2000)
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| Budget Amount *help |
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2000: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 1999: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
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| Keywords | Dendritic cell / CD34 / 臍帯血 / 腫瘍免疫 / dendriticcell |
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| Research Abstract |
CD34陽性細胞からDendritic cellへと脱分化させることが可能であるが、まずCD34陽性細胞を安定して採取する必要がある。臍帯血中にはCD34陽性細胞が多く存在することが知られており、臍帯血からCD34陽性細胞を分離する方法を検討した。
密度勾配遠心分離法および磁気抗体カラム法を用いた。臍帯血からRPMI1640培地またはEDTA/PBSを用いた比重遠心法により単核球を採取。マイクロビーズ(酸化鉄、多糖類)標識したヒトIg、ハプテン標識マウス抗CD34抗体を単核球インキュベートし、単核球中のCD34陽性細胞を磁気標識する。磁気抗体カラム法でCD34陽性細胞を分離した。陽性率(純度)を確認の確認にはFACSを用いた。
臍帯血、7検体を検討した。採取された臍帯血量は70〜90ml。そのうち密度勾配遠心分離法により得られた単核球は0.2〜6.0×10^8個であった。さらにCD34陽性細胞は0.3〜43.0×10^8個であり、採取された単核球のうちCD34陽性細胞は0.02〜0.75%であった。これはFACSによるCD34陽性細胞純度では50.8〜66.4%であった。
採取精製されたCD34陽性細胞ををGM-CSFとTNF-αを添加した培地により培養した。培養期間および添加濃度によりCD34陽性細胞数の変化と細胞の種類の検討を現在行っている。これらの問題を解決し、さらにCD34陽性細胞を分離しDendritic cellへと脱分化の検討、および抗腫瘍効果の検討をしたい。
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