| Project/Area Number |
11877161
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Psychiatric science
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| Research Institution | Saitama Medical University |
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Principal Investigator |
深津 亮 埼玉医科大学, 医学部, 教授 (10113614)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
続 佳代 札幌医科大学, 医学部, 助手 (60207420)
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| Project Period (FY) |
1999 – 2000
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2000)
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| Budget Amount *help |
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 2000: ¥900,000 (Direct Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 1999: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
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| Keywords | アルツハイマー病 / アミロイドβ蛋白 / APP遺伝子 / Aβブレイカー蛋白 / Aβブレイカー蛋白遺伝子 / 遺伝子導入 / マウス腹腔マクロファージ / アルツハイマー病(AD) / アミロイドβ蛋白(Αβ) / Αβブレイカー蛋白 / 遺伝子治療 / 抗Αβブレイカー蛋白抗体 / リポフエクタミン法 |
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| Research Abstract |
本研究の最終目的はAβブレイカー蛋白を脳で発現させてAβの沈着過程を阻害させることによりAD治療に応用することにある。そのために予備的検討を加えて以下の点を明らかにした。
I)遺伝子導入法、ベクター樹立法の検討:
最近の遺伝子治療で用いられることが多いレトロウイルスベクターを用いる方法を検討した。
発現ベクターとしてpDON-AIが最適であることが明らかにされた。
1)Aβブレイカー蛋白を発現するベクターの作成:pDON-AIベクターにAβブレイカー蛋白(すなわちLPFFD)に対するDNAの合成して組み込みに成功した。
2)Aβブレイカー蛋白に対する抗体の樹立:Aβブレイカー蛋白を合成して特異的な多クローン抗体を樹立した。この抗体は、ELISAでは、Aβと反応を示さず極めて特異性が高いことが示された。
II)標的細胞への遺伝子導入法の樹立:
Aβブレイカー蛋白遺伝子レトロウイルスベクターを標的細胞に導入:標的細胞としてヒト抹消血単球、並びにを採取・分離して培養しレトロウイルスベクターの導入を検討した。
III)遺伝子導入標的細胞の性格のin vitroでの検討:
1)Aβブレイカー蛋白遺伝子mRNA発現量の測定:遺伝子導入単球細胞にmRNAが発現されていることをnorthern ELISA法によって確認した。
2)遺伝子導入単球細胞でのAβブレイカー蛋白発現量の測定:遺伝子導入単球細胞を培養して細胞上清、及び細胞ホモジネイトを作成して単クローン抗体を用いたELISAにより検討している。
IV)遺伝子導入標的細胞の性格のin vivoでの検討:
遺伝子導入単球細胞を投与したマウス身体臓器、ならびにマウス脳needle trackにおけるにおけるAβブレイカー蛋白の発現については、特異的な多クローン抗体を用いて現在検討中である。
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