酵母を用いた中枢神経系における転写因子新遺伝子クローニングシステムの開発

• Project/Area Number: 11877230
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Cerebral neurosurgery
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 多田 光宏 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助教授 (10241316)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 濱田 淳一 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助教授 (50192703)
• Project Period (FY): 1999 – 2000
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2000)
• Budget Amount: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000); Fiscal Year 2000: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 1999: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
• Keywords: Yeast-based Genetic Diagnosis / Cloning of New Genes / Transcriptional Factor / Luciferase Assay / ADE2 gene / Central Nervous System / Cloning of new Genes

Research Abstract

本研究計画では、酵母(S.cerevisiae)内にて、広く哺乳動物の転写因子活性化能の定量を可能とするシステム(yeast-based luciferase assay;以下YLAと略)の構築を目的とする。それにより、転写因子の制御因子を単一あるいは複数個同時発現して制御システムを酵母内に再構築して検討を可能とする。本年度は以下の成果を得た.
1)p53 responsive element(p21,Bax)を含むプロモータ駆動をFirefly luciferaseをリポーターとして測定するシステムを完成,Renilla luciferase(内部標準)とともにp53,p73,p63によるプロモーター活性化の測定に成功した.
2)p53の変異体80種の転写活性化能を測定し,変異体は必ずしも全ての転写活性を失っているわけではないことを見いだした(投稿準備中).
3)p53に相互作用し,転写活性を上昇させるc-Abl,p33ING1,ING2を同時導入し,それらによる転写活性の上昇を確認した.
4)Tcf-4/β-cateninの転写活性を測定するアッセイも同様に確立し,APCを同時導入して転写活性が抑制されることを確認した(投稿準備中).
さらに本年度中にp53,p73,p63遺伝子またはTcf-4/β-cateninとともにcDNA libraryをADE2またはFirefly luciferaseのリポーター酵母株に導入し,これらの転写活性を調節する新しい遺伝子のクローニングをモデル実験として行う予定である.

Research Products

• [Publications] Nozaki M, Tada M et al.: "No p73 mutations in meningiomas as determined with a simple functional yeast assay, instead, increased p73 expression characterizes malignant meningiomas."Brain Pathology. (in press). (2001)
• [Publications] Tada M, Furuuchi K, et al.: "Inactivate the Remaining p53 Allele or the Alternate p73?-Preferential selection of the Arg72polymorphism in cancers with recessive p53 mutants but not transdominant mutants."Carcinogenesis. (in press). (2001)
• [Publications] Asaoka K, Tada M et al.: "Efficient adenoviral gene delivery in malignant glioma cells depends on the expression levels of coxsackievirus and adenovirus receptor."Journal of Neurosurgery. 92. 1002-1008 (2000)
• [Publications] Zhang C-L, Tada M, et al.: "Detection of PTEN nonsense mutation and psiPTEN expression in central nervous system high-grade astrocytic tumors by a yeast-based stop codon assay."Oncogene. 19. 4346-4353 (2000)
• [Publications] Asaoka, K.,Tada, M., et al.: "Efficient adenoviral gene delivery in malignant glioma cells depends on the expression levels of coxsackievirus and adenovirus receptor"Journal of Neurosurgery (in press). 未定(in press). (2000)
• [Publications] Ishii, N.,Tada, M., et al.: "Cells with TP53 mutations in low grade astrocytic tumors evolve clonally to malignancy and are an unfavorable prognostic factor"Oncogene. 18. 5870-5878 (1999)
• [Publications] Marutani, M.,Tada, M., et al.: "Dominant-negative mutations of the tumor suppressor p53 relating to early onset of glioblastoma multiforme"Cancer Research. 59. 4765-4769 (1999)
• [Publications] Ishii, N.,Tada, M., et al.: "Frequent co-alterations of TP53, p13, p14ARF, PTEN tumor suppressor genes in human glioma cell lines suggest that p53, Rb and PTEN belong to functionally separate pathways"Brain Pathology. 9. 469-479 (1999)
• [Publications] Nozaki, M.,Tada, M. et al.: "Roles of the functional loss of p53 and other genes in astrocytoma tumorigenesis and progression"Neuro-Oncology. 1. 149-162 (1999)