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軟骨組織における可溶性Wntレセプター(FRZB)の生理的役割の解明

Research Project

Project/Area Number 11877317
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Morphological basic dentistry
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

岩本 容泰  大阪大学, 大学院・歯学研究科, 講師 (30223431)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 栗栖 浩二郎  大阪大学, 大学院・歯学研究科, 教授 (50028346)
岩本 資己  大阪大学, 大学院・歯学研究科, 講師 (80203644)
Project Period (FY) 1999 – 2000
Project Status Completed (Fiscal Year 2000)
Budget Amount *help
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2000: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 1999: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Keywords軟骨形成 / wnt / 内軟骨性骨化 / Frzb / 血管新生 / Wnt / FRZB / 石灰化
Research Abstract

本年度は、(1)軟骨組織におけるWnt遺伝子の発現分布の検討検討、(2)WntおよびFrzbタンパク標品の作成、(3)血管新生に及ぼすFrzbの影響を検討した。
(1)in situ hybridization法による検索で、ニワトリ胚の肢芽の軟骨原基周辺にWnt4およびwnt5bの発現が検出された。また、RT-PCR法では、wnt3、wnt8ならびにwnt11のはつげんが検出された。特に、wnt8は、Frzbに結合することが知られており、軟骨細胞の最終分化を促進する役目を担う可能性がある。一方Frzbは、軟骨形成初期には軟骨原基全域で発現していたが、成長軟骨細胞の最終分化にともない発現が減少した。
(2)WntおよびFrzbをウイルスベクターに組み込み、線維芽細胞にtransfectionし、タンパクを発現させた。培養上清を回収し、上清中のWntおよびFrzbをキレートセファロースカラムにより精製を試みた。しかしながら、タンパクの収量が極めて悪く、生理活性の検討には至らなかった。細胞あたりの発現量をいかに増やすか、また、ともに等電点が8.5-9という塩基性の強いタンパクであるため精製過程の非特異的な吸着をいかに防ぐかが今後の問題である。
(3)精製したFrzbおよびWntが利用できなかったのでウイルスベクターを用いて、Frzbの血管新生に及ぼす影響を予備的に検討した。ニワトリ肢芽組織にFrzbを過剰発現させたところ、同部の軟骨組織では完全に血管誘導が起こらず、また、内軟骨性骨化も阻害された。ただし、軟骨周囲組織では、血管網の形成は認められたので、軟骨組織中の血管誘導阻害因子は、Frzb以外にも複数存在する可能性がある。また、Frzbの毛細血管内皮細胞に対する直接作用についても今後検討する必要がある。

Report

(2 results)
  • 2000 Annual Research Report
  • 1999 Annual Research Report
  • Research Products

    (12 results)

All Other

All Publications (12 results)

  • [Publications] Enomoto,H. et al.: "Cbfa1 is a positive rcgulatory factor in chondrocyte maturation."J.Biol.Chem.. 275. 8695-8702 (2000)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Iwamoto,M.: "Transcription factor ERG variants and functional diversification of chondrocytes during limb long bone development."J.Cell Biol.. 150. 27-40 (2000)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Ueta,C. et al.: "Skeletal malformations caused by overexpression of Cbfa1 or its dominant negative form in chondrocytes."J.Cell Biol.. In press.

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Enomoto-Iwamoto,M. et al.: "Hedgehog proteins stimulate chondrogenic cell differentiation and cartilage formation."J.Bone Miner.Res.. 15. 1695-1688 (2000)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] 岩本資己 ほか: "軟骨の発生と再生"実験医学. 18. 1325-1332 (2000)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] 岩本資己 ほか: "新・分子骨代謝学と骨粗鬆症"メディカル・ビュー社(印刷中).

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      2000 Annual Research Report
  • [Publications] A.Jikko: "The role of hepatocyte growth factor in growth plate cartilage"J. Bone Miner. Metab.. 16. 170-177 (1999)

    • Related Report
      1999 Annual Research Report
  • [Publications] Soma S.: "Effects of continuous infusion of PTH on experimental tooth moovement in rats"J. Bone Miner. Res.. 14. 546-554 (1999)

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      1999 Annual Research Report
  • [Publications] Yagami K.: "Matrix GLA protein is a developmental regulator of chondrocyte mineralization and, when constitutively expressed, blocks endochondral and intramembranous ossification in the limb"J. Cell Biol.. 147. 1097-1108 (1999)

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      1999 Annual Research Report
  • [Publications] M.Iwamoto: "Actions of Hedgehog Proteins on skeletal cells"Crit. Rev. Oral. Biol. Med.,. 10. 477-486 (1999)

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      1999 Annual Research Report
  • [Publications] Enomoto H.: "Cbfa-1 is a positive regulatory factor in chondrocyte maturation"J. Biol. Chem.. (印刷中). (2000)

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      1999 Annual Research Report
  • [Publications] 岩本資己: "軟骨の発生と再生"実験医学. (印刷中). (2000)

    • Related Report
      1999 Annual Research Report

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Published: 1999-04-01   Modified: 2016-04-21  

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