テロメラーゼ酵素活性を阻害する植物成分検索法確立の可能性

• Project/Area Number: 11877374
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Chemical pharmacy
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: 大塚 英昭 広島大学, 医学部, 助教授 (00107385)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 井出 利憲 広島大学, 医学部, 教授 (60012746)
• Project Period (FY): 1999 – 2000
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2000)
• Budget Amount: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000); Fiscal Year 2000: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000); Fiscal Year 1999: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
• Keywords: 癌 / テロメラーゼ / テリハボク / オトギリソウ科 / テロメア / テロメアーゼ / TRAP / 阻害物質

Research Abstract

癌細胞は脱分化を起こし、無限増殖能を獲得した細胞である。この細胞にはテロメア長維持機構、つまり通常は、発現していないテロメラーゼの活性が現れていることが多い。そこで本酵素活性を阻害する物質の探索は細胞の癌化阻害、ひいては固体における癌的病変を寛解する事を期待したい。
テロメラーゼ伸張反応は20度、30分間行い、その後90度3分間でテロメラーゼを失活させた。次いで94度45秒、50度45秒、72度60秒のPCR反応を27〜29リサイクル行うことで活性が測定できることが明らかとなった。増幅後は電気泳動でラダーを観察できた。
この方法を用いて幾つかの植物エキスについて検討した。最初に心配した共存する可能性のあるRNAaseによるテロメラーゼテンプレートの分解はあまり観測されなかった。
植物により明らかに差は認められるが、テロメラーゼ反応を阻害する様に見られるエキスでは、同時に内部標準物質であるITASの発現も阻害した様に感じられた。HIVのRNAをテンプレートとするDNAポリメラーゼの強力な阻害物質が蝸牛から発見されたが、実は食物連鎖でテリハボクの成分であろうとの結論に達している。そこで、沖縄で採集した本植物のエキスを用いて検討したところ、テロメアのラダーが確認されないと同時にITASのバンドも全く確認できなかった。ダイリューションをかけても同様で、多分にPCRに必要なTaqDNAポリメラーゼも阻害しているとの結論に達した。今後は同様な成分の検索をDNAをテンプレートとするTaqDNAポリメラーゼの阻害物質でも、いずれにしてDNAポリメラーゼであるテロメラーゼの阻害活性を担う可能性がある。よってITAS指標として簡便な方法で予備的スクリーニングを行う方が有効であると結論された。