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細胞チップを用いた抗原特異的T細胞の迅速・高効率な検出・作製法の開発

Research Project

Project/Area Number 11F01415
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section外国
Research Field Immunology
Research InstitutionUniversity of Toyama

Principal Investigator

村口 篤  富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 教授

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) JIN Aishun  富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 外国人特別研究員
JIN Aishun  富山大学, 大学院・医学薬学研究部(医学), 外国人特別研究員
Project Period (FY) 2011 – 2013
Project Status Completed (Fiscal Year 2013)
Budget Amount *help
¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Fiscal Year 2013: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2012: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2011: ¥200,000 (Direct Cost: ¥200,000)
Keywordsがんの免疫療法 / がん抗原特異的T細胞 / T細胞受容体 / マイクロアレイチップ
Research Abstract

近年、がんの免疫療法が注目を集めているが、治療の有効性を評価するよいシステムがないことが問題となっている。本研究では、金らが確立した画期的なリンパ球マイクロチップ法(Jin A. et al., Nature Medicine ; 15 : 1088-1092, 2009)を応用し、がん特異的T細胞を迅速にかつ高精度で検出し、癌特異的T細胞を迅速に作製することができる基盤技術を開発することを目的としている。
これまでに、抗原特異性が既知のTCRトランスジェニックマウスのT細胞を用い、細胞チップ上で抗原ペプチドで刺激することにより、抗原ペプチド刺激特異的なT細胞のサイトカイン産生を検出できることを示してきた。平成25年度は、この結果を踏まえ、ヒトのT細胞を用い、細胞チップ上で抗原特異的T細胞が検出できるかを検討した。抗原として、ほとんどの日本人が不顕性感染しているEBウイルスのペプチドを用いた。まず、ドナーの末梢血リンパ球をEBウイルスペプチドで刺激し、フローサイトメータを用いて解析し、EBウイルスペプチドに反応しサイトカインを産生するリンパ球が存在するかを確認した。次に、EBウイルスペプチドに反応するリンパ球を含むリンパ球を細胞チップに播種し、1個1個の細胞をマイクロウェルに格納した。チップにEBウイルスペプチドを添加し、細胞を刺激したところ、6時間後に、EBウイルスペプチド刺激特異的にサイトカインを産生する細胞を検出することができた。抗原刺激特異的にサイトカインを産生したT細胞を1個ずつ回収し、回収したリンパ球より、TCR c DNAをRT-PCRにて増幅した。TCRの配列を解析した結果、EBウイルスの特異的なTCRが取得されたことを確認した。
以上より、細胞チップを用いることで、抗原に特異的なTリンパ球を、短時間に、非常に高感度に検出できることを示すことができた。今後、この技術をがん免疫治療の効果の評価、及び、がん免疫治療に有効なTCRの取得に応用したい。

Strategy for Future Research Activity

(抄録なし)

Report

(3 results)
  • 2013 Annual Research Report
  • 2012 Annual Research Report
  • 2011 Annual Research Report
  • Research Products

    (15 results)

All 2013 2012

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (13 results)

  • [Journal Article] A new cloning and expression system yields and validates TCRs from blood lymphocytes of patients with cancer within 10 days.2013

    • Author(s)
      Kobayashi E., et al
    • Journal Title

      Nature Medicne

      Volume: 19 Issue: 11 Pages: 1542-1546

    • DOI

      10.1038/nm.3358

    • Related Report
      2013 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A novel rabbit immunospot array assay on a chip allows for the rapid generation of rabbit monoclonal antibodies with high affinity.2012

    • Author(s)
      Ozawa T., et al
    • Journal Title

      PLoS One

      Volume: 7 Issue: 12 Pages: e52383-e52383

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0052383

    • Related Report
      2012 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 末梢血リンパ球中の抗原特異的CD8+T細胞およびT細胞受容体の網羅的・迅速解析.2013

    • Author(s)
      岸 裕幸, 他
    • Organizer
      第5回造血器腫瘍免疫療法研究会学術集会
    • Place of Presentation
      名古屋
    • Year and Date
      2013-08-24
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] Detection of antigen-stimulated cytokine-secretion in human T-cells at single cell levels on a live cell chip.2013

    • Author(s)
      Kishi H., et al
    • Organizer
      Measuring Antigen-Specific Immune Responses (MASIR) 2013
    • Place of Presentation
      Dubrovnik
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] A. Cloning of human antigen-specific TCRs can confer the candidates for cancer gene therapy.2013

    • Author(s)
      Kobayashi E., et al
    • Organizer
      15^<th> International Congress of Immunology
    • Place of Presentation
      Milan
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] リン酸化ペプチド及びGPCR特異的ウサギモノクローナル抗体の迅速作製法の開発.2013

    • Author(s)
      小澤 龍彦, 他
    • Organizer
      第36回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] Cis-interaction of TCR and antigenic peptides with MHC class I molecules on a CD8^+ T-cell.2013

    • Author(s)
      Kishi H., et al
    • Organizer
      第42回日本免疫学会学術集会
    • Place of Presentation
      千葉
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] Rapid generation of rabbit monoclonal antibodies against phosphorylated peptides and G-protein coupled receptor.2013

    • Author(s)
      Ozawa T, et al
    • Organizer
      第42回日本免疫学会学術集会
    • Place of Presentation
      千葉
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] Cloning and functional analysis of human telomerase reverse transcriptase (hTERT)-specific TCRs from peptide-vaccinated patients.2013

    • Author(s)
      Kobayashi E., et al
    • Organizer
      第42回日本免疫学会学術集会
    • Place of Presentation
      千葉
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] hTEC4 system that enable us to clone TCR cDNA from antigen specific single T cells with in 4 days.2013

    • Author(s)
      Hamana H., et al
    • Organizer
      第42回日本免疫学会学術集会
    • Place of Presentation
      千葉
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] A novel human TCR efficient cloning system confers candidate for TCR gene therapy within 10 days.2012

    • Author(s)
      Kobayashi E, et al
    • Organizer
      27th Annual Meeting of Society for Immunotherapy of Cancer
    • Place of Presentation
      North Bethesda, USA
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Presentation] Detection of antigen-stimulated cytokine secretion in human T-cells at single cell levels on a live cell chip.2012

    • Author(s)
      岸 裕幸, 他
    • Organizer
      第41回日本免疫学会学術集会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Presentation] The binding affinity of a soluble TCR-Fc fusion protein is significantly improved by crosslinkage with an anti-Cβantibody.2012

    • Author(s)
      小澤 龍彦, 他
    • Organizer
      第41回日本免疫学会学術集会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Presentation] Cloning of human antigen-specific TCRs can confer the candidates for cancer gene therapy.2012

    • Author(s)
      小林 栄治, 他
    • Organizer
      第41回日本免疫学会学術集会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Presentation] Comparison of TCR repertoires in EBV-specific T cells detected by three different staining methods.2012

    • Author(s)
      浜名 洋, 他
    • Organizer
      第41回日本免疫学会学術集会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Related Report
      2012 Annual Research Report

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Published: 2011-12-22   Modified: 2024-03-26  

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