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動物細胞におけるオーキシン誘導デグロン法を応用した、合成生物学的遺伝学の創出

Research Project

Project/Area Number 11J02503
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section国内
Research Field Living organism molecular science
Research InstitutionNational Institute of Genetics

Principal Investigator

西村 浩平  国立遺伝学研究所, 分子遺伝学研究系, 待別研究員(PD)

Project Period (FY) 2011 – 2013
Project Status Completed (Fiscal Year 2013)
Budget Amount *help
¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
Fiscal Year 2013: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2012: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2011: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
KeywordsMCM8 / MCM9 / 相同組組換え / AID法 / Elg1 / Homologous Recombinataion / オーキシン / デグロン / 遺伝学
Research Abstract

申請者は昨年DNA複製因子として考えられていたMcm8そしてMcm9が複合体を形成し、DNA二本鎖架橋のダメージの際の相同組換え修復において機能することを見いだし、論文として発表した。本年はこのニワトリDT40細胞におけるMcm8-9の機能をさらに多面的に解析するために、Mcm8-9複合体の精製を行い、ニワトリDT40細胞からMcm8-9複合体を精製することに成功した。この精製した複合体について生化学的また構造学的な解析を進めるための準備を現在行っている。またMcm8,9の遺伝学的な解析をさらに行う上でMcm8, およびMcm9のコンディショナルミュータントを当研究室で開発されたAID法を用いてMcm8-aid, Mcm9-aid株を作成し、表現型を確認したところ、いずれの場合もノックアウト細胞と比べて表現型が弱くなっていた。この結果を受けて当初考えていたマウスES細胞におけるAIDミュータントの作成に先立ち、AID法における標的タンパク質の分解の更なる効率化を行うこととした。出芽酵母において研究を行い、分解誘導に必要なタグの大きさを従来の3分の1にまで縮小することに成功した。さらにこのタグを3つ連続してつなげることによって従来よりも高効率の分解を誘導することに成功した。この分解の効率化によって、解析の困難であったElg1の機能解析が可能となり、分解効率の効率化とElg1の解析結果を併せて、論文に発表した。

Strategy for Future Research Activity

(抄録なし)

Report

(3 results)
  • 2013 Annual Research Report
  • 2012 Annual Research Report
  • 2011 Annual Research Report
  • Research Products

    (8 results)

All 2013 2012 2011

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (5 results)

  • [Journal Article] The Elg1 Replication Factor C-like complex function in PCNA unloading during DNA replication2013

    • Author(s)
      T. Kubota, K. Nishimura, M. T. Kanemaki, A. D. Donaldson
    • Journal Title

      Molecular Cell

      Volume: 50 Pages: 273-280

    • Related Report
      2013 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Mcm8 and Mcm9 form a complex that functions in homologous recombination induced by interstrand crosslinks2012

    • Author(s)
      K. Nishimura
    • Journal Title

      Molecular Cell

      Volume: 47 Issue: 4 Pages: 511-522

    • DOI

      10.1016/j.molcel.2012.05.047

    • Related Report
      2012 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Auxin-inducible protein depletion system in fission yeast2011

    • Author(s)
      Kanke M
    • Journal Title

      BMC Cell Biology

      Volume: 12 Issue: 1 Pages: 8-8

    • DOI

      10.1186/1471-2121-12-8

    • Related Report
      2011 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] The Mcm8-9 complex promotes DNA synthesis after strand invasion in recombination repair.2013

    • Author(s)
      西村浩平、夏目豊彰、石合正道、深川竜郎、高田穣、鐘巻将人
    • Organizer
      第36回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      神戸
    • Year and Date
      2013-12-04
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] Mcm8-9複合体はICL修復における相同組換え鎖潜り込み反応後のDNA合成反応を促進する2013

    • Author(s)
      西村浩平、夏目豊彰、石合正道、深川竜郎、高田穣、鐘巻将人
    • Organizer
      第22回複製・修復・組換えワークショップ
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      2013-11-21
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] Mcm8 and Mcm9 form a complex that functions in homologous recombination repair induced by DNA interstrand-crosslinks2012

    • Author(s)
      西村浩平
    • Organizer
      第35回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      2012-12-12
    • Related Report
      2012 Annual Research Report
  • [Presentation] Mcm8 and Mcm9 form a novel complex involved in resistance to DNA crosslinking reagents2011

    • Author(s)
      西村浩平
    • Organizer
      第34回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      横浜
    • Year and Date
      2011-12-15
    • Related Report
      2011 Annual Research Report
  • [Presentation] 新規Mcm8-9複合体の機能解析2011

    • Author(s)
      西村浩平
    • Organizer
      第21回DNA複製・組換え・ゲノム安定性ワークショップ
    • Place of Presentation
      福岡
    • Year and Date
      2011-10-25
    • Related Report
      2011 Annual Research Report

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Published: 2011-12-12   Modified: 2024-03-26  

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