| Budget Amount *help |
¥2,400,000 (Direct Cost: ¥2,400,000)
Fiscal Year 2013: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2012: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
Fiscal Year 2011: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
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| Research Abstract |
Rabは膜融合における鍵因子の一つであり,Rabの多様化とオルガネラの多様化には密接な関連があると考えられている.本研究では植物とアピコンプレクス門原虫にのみ存在する特異的なRabである,Rab5bの機能解析を通じて,両生物に特異的なオルガネラ制御システムを明らかにしようとするものである.
Rabの機能を知るにはその局在について詳細を明らかにする必要がある.そこで,本年度はマラリア原虫を用いてRab5bの局在について詳細な解析を行った.抗Rab5b抗体,およびRab5bにエピトープタグを付与させたタンパク質の過剰発現による局在解析の結果,Rab5bが細胞内のドット状のオルガネラに局在することに加え,一部が感染赤血球内に分泌されていることが明らかになった.また,このドット状のオルガネラは,ゴルジ体,エンドソームなどの既知のオルガネラとは異なる未知のオルガネラであった.このことから,Rab5bは未知のドット状のオルガネラを経由して感染赤血球内に輸送されていることが示唆された.さらに,Rab5bの感染赤血球への輸送にはRab5b特異的な脂質修飾のみで十分であること,マラリア原虫においてはRab5b同様の脂質修飾を受けるタンパク質が同様に感染赤血球に輸送されることが明らかになった.これらのことから,Rab5bが特定の脂質修飾を受けたタンパク質を感染赤血球内に輸送していることが考えられる.
この他,Rab5bの相互作用因子の網羅的解析による,Rab5bの機能発現の分子メカニズム解析のため,本年度はRab5bと相互作用することが期待されるVps9ドメインを持つタンパク質の抗体を作成した.また,Rab5bと他のRab5のキメラタンパク質を用いた機能相補実験から,Rab5bの機能にはそのほぼ全長が保存されている必要があることが明らかになった.
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度の研究により,Rabsbの局在についての詳細が明らかになった.また,相互作用因子の単離,解析についても,その準備が整った.機能欠損変異体の作出に関しては,当初予定していた手法とは異なるものであるが,より有効な手法を用いた解析が現在進行しており,全体的におおむね順調であると言える.
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| Strategy for Future Research Activity |
昨年度の解析から,Rabsbがマラリア原虫において感染赤血球内への輸送を制御することが示唆された.そこで,本年度はRab5bの機能欠損変異体における輸送異常の解析を行い,細胞内局在のデータとあわせてRabsbが制御する輸送経路を特定する予定である.現在までに発現誘導系を用いた変異体の作出を試みているが,現在までに株の作出に成功していない.近年,マラリア原虫でanti sense morpholino oligoを用いた標的遺伝子の発現低下株の作出手法が報告された.そこで,現在これを用いたRabsb機能欠損変異体の表現型解析を行っている.この他に,相互作用因子の単離のため,昨年度作成したVps9抗体をコントロールとしてpull downによる相互作用因子単離を行う予定である.
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