組み換え修復に及ぼすp53蛋白質の機能に関する研究
| Project/Area Number |
12213123
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Review Section |
Biological Sciences
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
瀬川 薫 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (30114523)
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| Project Period (FY) |
2000
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2000)
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| Budget Amount *help |
¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000)
Fiscal Year 2000: ¥2,500,000 (Direct Cost: ¥2,500,000)
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| Keywords | p53蛋白質 / Rad51蛋白質 / Rad52蛋白質 / 組み換え修復 |
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| Research Abstract |
1、精製したRad51、Rad52蛋白質は、野生型およびN末端を欠失させたΔNN変異p53蛋白質のDNA鎖交換活性、DNAアニーリング活性を量依存性に阻害した。また、ΔNN変異p53蛋白質は、Rad52のRPA依存性のDNAアニーリング活性を同様に阻害した。これらの結果より、p53蛋白質が組み換え修復反応を担うRad蛋白質の機能の一部を抑制できる可能性が示唆された。転写活性化ドメインを欠失させた変異株でも同様な結果が得られたことより、転写の活性化や抑制化を介さずp53蛋白質は、Rad蛋白質の機能を制御できることも示唆された。予備的実験では、p53のC末端領域が関与していることを示す結果が得られている。現在、p53蛋白質が、組み換え修復を担う複合体(repairsome)中に存在しているかどうか解析中である。
2、MMS処理後の生存率は、野生型酵母では未処理の対照とほぼ同じであったが、Rad51変異株では1/10,000以下に減少した。Rad51変異株に、Gal1-Gal10プロモーターに連結した野生型およびΔNN変異p53遺伝子を導入し、MMS処理後の生存率を測定した。ガラクトース培地で増殖させ、野生型p53遺伝子を発現させた場合のMMS処理後の生存率は、グルコース培地で増殖させた対照に比較し、約7倍上昇した。また、ΔNN変異p53遺伝子を発現させた場合は、約20倍上昇することが判明した。これらの結果は、ヒトp53蛋白質が酵母の組み換え修復反応の欠損を機能的に相補できることを示唆する。p53蛋白質は、多量体を形成しDNAを覆うように結合することはできないことから、直接Rad51蛋白質の機能を代行できるとは考えにくい。ΔNN変異p53遺伝子の発現によって、野生型よりも高い生存率が観察されたため、p53蛋白質の転写活性化能以外の機能の関与が示唆された。現在、p53蛋白質の機能的サプレションに非相同末端結合(non-homologous end joining)が関与してい可能性を検討中である。
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Report
(1 results)
Research Products
(1 results)
