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遺伝子欠損マウスを用いた癌化シグナル伝達におけるMAPキナーゼの機能の解析

Research Project

Project/Area Number 12215027
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Biological Sciences
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

吉田 進昭  東京大学, 医科学研究所, 教授 (10250341)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 市瀬 広武  東京大学, 医科学研究所, 助手 (10313090)
Project Period (FY) 2000 – 2001
Project Status Completed (Fiscal Year 2000)
Budget Amount *help
¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
Fiscal Year 2000: ¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
KeywordsMAPキナーゼ / erk1 / erk2 / マウス
Research Abstract

マウスerk1,erk2遺伝子の全長を含むインサートサイズ30kb以上のゲノムDNAクローンを用いて、それぞれヒト由来翻訳調節配列の下流にレポーター遺伝子を接続したカセットをエクソンに挿入した発現ベクターを構築した。このベクターを培養細胞に導入し、発現ベクターとして機能的であることを確認した上で、実際のターゲティングに使用するのに適当な領域をサブクローニングする手法を試みている。1)erk1遺伝子はマウスゲノムDNAライブラリーのスクリーニングによって単離し、使用した。erk2遺伝子は、マウスの整列化P1ゲノムDNAライブラリーのクローンを購入して使用した。2)ヒトNRF(NF-κ B releasing Factor)の5'UTRはCap構造に依存せず、組織非特異的に機能し、翻訳効率に優れていることが示唆されている。、このヒトNRF5'UTRのknock-inストラテジーにおける利用を目的としてクローニングした。ヒトゲノムDNAを鋳型としたPCR産物をクローニングした。3)ヒトNRF5'UTRの下流に、2個のloxPサイト、ポリAシグナル配列を接続し、loxPサイト間に任意のcDNAを挿入できるカセットを作成した。このカセットを、erk1遺伝子およびerk2遺伝子のエクソンに挿入した。被挿入側のerk1およびerk2遺伝子は、Fosmid、P1のクローンをそれぞれ使用し、カセット挿入位置の異なる数種類のプラスミドを得た。これらのプラスミドのloxPサイト間にレポーター遺伝子のcDNAを挿入したものを作成後、培養細胞に導入した。現在、レポーター遺伝子の発現を元に、knock-inベクターのバックボーンとして最適と考えられるクローンを選択している。

Report

(1 results)
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    (3 results)

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All Publications (3 results)

  • [Publications] Hirata,A. et al.: "Abnormalities of Synapses and Neurons in the Hippocampus of Neuropsin-Deficient Mice."Mol.Cell.Neuroscience,. (in press).

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  • [Publications] Aono,A. et al.: "Forced expression of terminal deoxynucleotidyl transferase in fetal thymus resulted in a decrease in γδT cells and random dissemination of Vγ3Vδ1 T cells in skin of newborn but not adult mice."Immunology,. 99. 489-497 (2000)

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  • [Publications] Matsuoka,T. et al.: "Prostaglandin D_2 as a mediator of allergic asthma."Science. 287. 2013-2017 (2000)

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Published: 2000-04-01   Modified: 2018-03-28  

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