抗内在性レトロウイルス自己抗体を用いたヒト腎炎原因抗原の遺伝子単離

• Project/Area Number: 12770100
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Human pathology
• Research Institution: Kinki University
• Principal Investigator: 阿部 弘之 近畿大学, 医学部, 助手 (80309335)
• Project Period (FY): 2000 – 2001
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2001)
• Budget Amount: ¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000); Fiscal Year 2001: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000); Fiscal Year 2000: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
• Keywords: ウイルス / 自己抗原 / 腎炎 / ゲノム解析

Research Abstract

我々が樹立したモノクローナル抗体に反応し、腎病変局所に局在する分子の遺伝子を単離するにあたり、以下の2つの作業仮説をたてた。
作業仮説1、目的とする分子は、患者染色体DNA上に存在する遺伝子によってコードされる。
作業仮説2.モノクローナル抗体が交差反応することから、目的とする分子は、この抗体に反応することが判っている分子とアミノ酸レベル・塩基レベルでの相同性が高い。
上述の作業仮説に従い、まず抗体が認識するエピトープを含む遺伝子断片をプローブとしてGenomic Southern Blottingを行い、プローブと相同性の高い塩基配列が患者染色体DNA上に存存することの確認を試みた。ハイブリダイゼーション反応は、塩濃度5×SSPE、温度55度(ホルムアミド非存在下)で行った。洗いは、2×SSC-0.1%SDSを用いて55度20分/60度20分/65度20分各1回行った。その結果、プローブと相同性の高い塩基配列が確かに在在することが判明した。この塩基配列は、全染色体DNA上に少なくとも5コピー存在し、患者のみでなく健常人(日本人男女、白人男性)の染色体DNA上にも存在していた。患者染色体DNA、健常人染魚体DNAの間で、明確なRFLPは見いだせなかった。
次に、この塩基配列を食む遺伝子断片を単離するためにラムダファージベクターを用いてGenomic Libraryを構築した。このGenomic Libraryを、Southern Blottingと同じ条件でスクリーニングした結果、10クローンのファージを単離できた。現在、各ファージに組み込まれたヒト遺伝子断片の塩基配列を解析中である。

Research Products

• [Publications] Nobutada Tabata: "Establishment of Monoclonal Anti-Retroviral gp70 Autoantibodies from MRL/1pr Lupus Mice and Induction of Glomerular gp70 Deposition and Pathology by Transfer into Non-Autoimmune Mice"Journal of Virology. Vol.74,No.9. 4116-4126 (2000)