天疱瘡における抗原特異的B細胞の検出法並びにin vitro抗体産生系の開発

• Project/Area Number: 12770455
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Dermatology
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 角田 和之 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (60265915)
• Project Period (FY): 2000 – 2001
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2001)
• Budget Amount: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000); Fiscal Year 2001: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 2000: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
• Keywords: 自己免疫 / 自己抗体 / B細胞 / 天疱瘡 / ELISPOT法 / デスモグレイン / 細胞接着 / カドヘリン

Research Abstract

本研究では、天疱瘡における自己抗体を産生するB細胞を検出する方法を組換え天疱瘡抗原を用いたELISPOT法により確立することを目的とする。末梢血中に存在する天疱瘡抗原特異的B細胞の数が、病勢と相関するか検討し、B細胞を標的とした治療法の開発の基礎的データとする。さらに、自己抗体産生におけるT細胞、B細胞の相互作用を検討するために、in vitroにおける自己抗体産生系を構築することを目的とする。昨年度までは、尋常性天疱瘡抗原(Dsg3)に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を陽性細胞として用いて、組換えDsg3を抗原としたELISPOTによる検出系を確立した。さらに、組換えDsg3にて免疫したマウスの脾臓、リンパ節、骨髄および、末梢血から単核球を分離し、Dsg3組換え抗原蛋白を用いたELISPOT法により、各臓器中に含まれるDsg3特異的抗体を産生するB細胞の算定した。また、我々の開発した天疱瘡モデルマウスにおける抗体産生細胞をELISPOT法により検出し、経時的変化を検討した。本年度は天疱瘡患者末梢血より分離された単核球を組み換えDsg3蛋白とマイトジェンにて刺激後ELISPOT法を行うことによりメモリーDsg3特異的B細胞を検出し、in vitro抗体産生系を開発した。このin vitro抗体産生系はT・B細胞の相互作用の解析などにも有用であると考えられた。

Research Products

• [Publications] Nishifuji K, Amagai M, Kuwana M, Iwasaki T, Nishikawa T: "Detection of antigen-specific B cells in patients with pemphigus vulgaris by enzyme-linked immunospot (ELISPOT) Assay : requirement of T cell collaboration for autoantibody production"J Invest Dermatol. 114. 88-94 (2000)
• [Publications] Amagai M, Tsunoda K, Suzuki H, Nishifuji K, Koyasu S, Nishikawa T: "Use of autoantigen knockout mice to develop an active autoimmune disease model of pemphigus"J Clin Invest. 105. 625-631 (2000)
• [Publications] Hata Y, Fujii Y, Tsunoda K, Amagai M: "Production of the entire extracellular domain of BP180 (type XVII collagen) by baculovirus expression"J Dermatol Sci. 23. 183-190 (2000)
• [Publications] Tsunoda K, Ota T, Suzuki H, Ohyama M, Nagai T, Nishikawa T, Koyasu S, Amagai M: "Pathogenic autoantibody production requires loss of tolerance against desmoglein 3 in both T and B cells in experimental pemphigus vulgaris"Eur J Immunol. 32. 627-633 (2002)
• [Publications] Nishifuji K,Amagai M,Kuwana M,Iwasaki T,Nishikawa T: "Detection of antigen-specific B cells in patients with pemphigus vulgaris by enzyme-linked immunospot (ELISPOT) Assay : requirement of T cell collaboration for autoantibody production."J Invest Dermatol. 114. 88-94 (2000)
• [Publications] Amagai M,Tsunoda K,Suzuki H,Nishifuji K,Koyasu S,Nishikawa T: "Use of autoantigen knockout mice to develop an active autoimmune disease model of pemphigus."J Clin Invest. 105. 625-631 (2000)
• [Publications] Hata Y,Fujii Y,Tsunoda K,Amagai M: "Production of the entire extracellular domain of BP180 (type XVII collagen) by baculovirus expression."J Dermatol Sci. 23. 183-190 (2000)