| Project/Area Number |
12770771
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Cerebral neurosurgery
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
田原 重志 日本医科大学, 医学部, 助手 (80277540)
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| Project Period (FY) |
2000 – 2001
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2001)
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| Budget Amount *help |
¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
Fiscal Year 2001: ¥400,000 (Direct Cost: ¥400,000)
Fiscal Year 2000: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
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| Keywords | Pituitary / Pituitary adenoma / NSF-SNAP-SNARE / Human / Exocytosis / Immunohistochemistry / RT-PCR |
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| Research Abstract |
下垂体細胞・腺腫における分泌顆粒の細胞内輸送を調節する因子として、Rab3 isoformとNSF-SNAP-SNARE系蛋白が知られているが、前者の細胞内局在については、我々がMod Pathol 12,627-34,1999.にすでに報告している。今回平成12〜13年度には後者のNSF-SNAP-SNARE系蛋白、特にvesicle SNAREであるsynaptobrevin/VAMP(vesicle-associated membrane protein)に注目し、手術によって得られた下垂体腺腫サンプルを対象として、NSF-SNAP-SNARE系の発現を免疫組織学的手法を用いて検討した。対象となる腺腫は4%paraformaldehydeにて固定し、パラフィン切片とした。使用した抗体は抗VAMP-1抗体(santa Curlz社)であり、ABC法にて免疫染色を行った。結果としては、下垂体腺腫に広くVAMP-1の発現が観察されたが、特にGH産生腺腫(Ghoma)の89%に高率に陽性を示した。さらにGhomaにおいては陽性細胞の比率が高く、また細胞内局在においても細胞膜周囲のみならず、細胞質にも強く発現していた。平成13年度は、VAMP-1の細胞内局在を確認するために、下垂体腺腫サンプルを使用し、免疫電顕を施行した。方法はprotein A goldを用いたpost embedding法を選択したが、VAMP-1は分泌顆粒の特に限界膜近傍での発現が観察された。これはRab3蛋白の局在と同様であり、synaptobrevin/VAMPは分泌顆粒を介してのホルモン分泌制御に関与していることが示唆された。これは、一般的に分泌顆粒の多い、Ghomaに高率に発現していることからも納得できる結果と思われる。
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