遺伝子組み換え技術を応用した覆髄剤の開発

• Project/Area Number: 12771155
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Conservative dentistry
• Research Institution: Kanagawa Dental College
• Principal Investigator: 角田 晃 神奈川歯科大学, 歯学部, 助手 (70236933)
• Project Period (FY): 2000 – 2001
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2001)
• Budget Amount: ¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000); Fiscal Year 2001: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 2000: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
• Keywords: 骨シアロタンパク質 / バキュロウィルス / 細胞接着活性

Research Abstract

ヒト組み換え骨シアロタンパク質の生化学的特性の解析
昨年度の研究で、我々はバキュロウイルス発現システムを用いて、組み換えヒト骨シアロタンパク質(rhBSP)をSf9細胞内で65kDaおよび60kDaの分子量サイズで発現することに成功した。またcobalt affinity chromatographyを用いて、その精製に成功した。そこで今年度は、rhBSPの生理活性を調べる目的で、ウシ歯小嚢由来前駆体細胞(Bovine Dental Follicle Cells ; BDFC)に対する細胞接着活性を測定した。
実験方法はrhBSPをコートした96-multi well plateに、[S^<35>]methionineでラベルした2×10^4個のBDFCを播種し、37℃で1時間インキュベートを行った。接着した細胞数は、細胞を0.1%SDSで可溶化したのちに液体シンチレーションカウンターを用いて測定した。その結果、rhBSPは、BDFCに対して有意に細胞接着活性を有することが認められた。以上の結果より、本システムは生理活性を有するrhBSPを発現させるのに有用である可能性が示唆された。
しかしながら、本システムでは、創薬を主眼とした場合にタンパクの発現量に問題を残しており、現在より高い収量を得ることを目的として、in vitro translation systemおよびタンパク高発現型昆虫細胞および改良型ベクターを用いた実験を立案中である。

Research Products

• [Publications] Keisuke Handa, Akira Tsunoda et al.: "Characterization of Bovine Dental Follicle Cells isolated from tooth germ"The Bulletin of Kanagawa Dental College. Vol.28,No.1. 26-29 (2000)
• [Publications] Keisuke Handa, Masahiro Saito, Masato Yamauchi, Akira Tsunoda et al.: "Isolation and characterization of Dental Follicle Cells derived from bovine developing tooth germ"The Bulletin of Kanagawa Dental College. Vol.29,No.1. 4-6 (2001)