| Project/Area Number |
12771449
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Environmental pharmacy
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| Research Institution | Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center |
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Principal Investigator |
生田 統悟 埼玉県立がんセンター, 研究室, 研究員 (00262072)
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| Project Period (FY) |
2000 – 2001
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2001)
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| Budget Amount *help |
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2001: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2000: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
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| Keywords | Ahレセプター / 核移行シグナル / 核外移行シグナル / シャトル蛋白質 / LxxLLモチーフ / ARNT / CYP1A1 / XRE / ケラチ / サイト |
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| Research Abstract |
1.AhR活性化に関わる細胞内シグナル伝達経路について
AhR活性化に関わる細胞内シグナルを解析するためレポーターとしてXREtk-LuciferaseならびにXREtk-GFP発現ベクターをヒト表皮角化細胞株HaCaTに導入したneo耐性クローンを分離し、AhR/ARNTの転写因子としての活性を調節するシグナルを解析した。細胞の培養密度が低い時には高いレポーター活性が検出されたが、高密度下では低下した。また血清添加によりレポーターは誘導された。さらに内在するAhR蛋白質の細胞内局在は、低密度時には細胞質および核に見られた一方で、高密度では主に細胞質に存在した。AhRのリン酸化による細胞内局在の可能性を検討した結果、NLS近傍のSer、Thrのアミノ酸置換により、AhRの局在は変化する事が示された。以上のようにAhRの活性は細胞密度および血清刺激また蛋白質リン酸化により調節され得ることを明らかにした。
2.AhRのLxxLLモチーフの機能解析
AhR(50-54)および(224-228)に存在するLxxLLモチフのアミノ酸置換体をCOS細胞で発現させ、AhRの細胞内局在および転写調節活性に及ぼす影響を解析した。AhR(224-228)の変異による変化は検出されなかったが、(50-54)の変異はリガンド非依存性の核移行を促進し、さらにXREtk-Luciferaseの活性を低下させた。この変異はAhRとHSP90およびARA9との結合を低下させなかったが、AhR/ARNT/XRE複合体形成を抑制した。これらよりAhR(50-54)に存在するLxxLLモチーフは、AhR蛋白質の三次元構造の維持に重要な機能をもつことが示唆された。
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