小児脳幹部神経膠腫の細胞周期解析-その増殖能と細胞周期関連遺伝子異常について-

• Project/Area Number: 12877208
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Cerebral neurosurgery
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 田中 隆一 新潟大学, 脳研究所, 教授 (30018816)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高橋 英明 新潟大学, 医学部・附属病院, 講師 (70236305) ; 森井 研 新潟大学, 医学部・附属病院, 助手 (20230089)
• Project Period (FY): 2000 – 2001
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2001)
• Budget Amount: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000); Fiscal Year 2001: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000); Fiscal Year 2000: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
• Keywords: 小児脳腫瘍 / 脳幹部神経膠腫 / がん抑制遺伝子 / RB遺伝子 / 遺伝子治療

Research Abstract

当施設にてこれまでに樹立、継代され、すでにp53、p16、p21、PTEN遺伝子の変異が検索されてきた成人大脳半球の膠芽腫の培養細胞10株を用いてRB遺伝子(Retinoblastomaがん抑制遺伝子)の変異を検索した。変異の検索はDNA、mRNA蛋白のそれぞれについて検索した。その結果は次の通りであった。
(1)DNAについては、その欠失について13番染色体長腕の13q14.2に存在するRB遺伝子座のイントロン20内に存在するmicrosatellite marker Rb1.20を用いて検索し、10株中7株に一方の遺伝子の欠失(LOH: loss of heterozygousity)の可能性が示唆され、RB mRNAの変異部位に対応する部分のDNAのシークエンスで遺伝子欠失・変異を認めた。
(2)mRNAについてはノーザンブロット法にてその発現を検索し、10株中1株(LOH陽性例)で発現の消失が認められた。またRT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)法による発現の検索では発現消失例はなく、全例にmRNAが認められた。
次に、RB mRNAの変異の検察については、RB mRNAの全長の83%に対してRNA-SSCP法およびシークエンスを行い10株中2株においてRb mRNAの部分的欠損が認められた(いずれもLOH陽性例)。
(3)蛋白についてはウエスタンブロット法によるRB蛋白の発現の解析、およびゲルシフト法によるRB蛋白の機能(E2Fへの結合)の解析を行ったが、正常RB蛋白との有意な差は得られなかった。