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軟骨特異的な選択的スプライシング因子に関する研究

Research Project

Project/Area Number 12877227
Research Category

Grant-in-Aid for Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Orthopaedic surgery
Research Institution大分医科大学

Principal Investigator

吉岡 秀克  大分医科大学, 医学部, 教授 (00222430)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 松尾 哲孝  大分医科大学, 医学部, 助手 (10284788)
モハメド カレドザマン  大分医科大学, 医学部, 助手 (70305035)
Project Period (FY) 2000 – 2001
Project Status Completed (Fiscal Year 2001)
Budget Amount *help
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 2001: ¥500,000 (Direct Cost: ¥500,000)
Fiscal Year 2000: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Keywordsマイナーコラーゲン / 選択的スプライシング / 軟骨 / 細胞外マトリックス / ホモロガスリコンビネーション
Research Abstract

1.ミニジーンによる転写産物の解析
マウスα1(XI)鎖遺伝子のエクソン5、6A、6B、7、8、9を含むミニジーンを用いて、この領域の選択的スプライシングの実験を行った。使用した細胞はRCS(軟骨肉腫細胞)、A204(横紋筋肉腫細胞)及び293細胞(胎児腎細胞)の三種類である。前二者はα1(XI)鎖発現細胞であり、後者は非発現細胞である。RCSにおいては6B-7-8、6A-7-8、7-8、6B-7、7のパターンが見られた。一方、A204では6A-7-8が見られ、293細胞も同様に6A-7-8のパターンが見られた。これは6A-7-8がこの遺伝子のスプライシングにおける基本型であり、軟骨には特別な組織特異的な因子が必要であることを示唆するものであった。さらにDNA断片を欠失させて作製したコンストラクトを用いた実験を行った。その結果、エクソン7が、軟骨型パターンを生じるのに重要であることがわかった。また、エクソン6Bにおいて、軟骨の特異的発現に重要と思われるプリン・リッチ及びAC・リッチ・エクソンスプライシング・エンハンサー領域が同定できた。今後、この因子の同定を行っていく予定である。
2.ホモロガスリコンビネーション法を用いた特定エクソン欠損マウスの作製
エクソン6-8の欠損マウスを作製する為にまずES細胞を用いてキメラマウスを作製し、さらにヘテロマウス及びホモの欠損マウスを作製した。このマウスを用いて生化学的、形態学的、発生学的に解析を行っている。又、エクソン6A及び6B領域の機能を解析する為に、エクソン6B及び6A欠損のターゲティングベクターを作製した。今後、これを用いて欠損マウスを作製する予定である。

Report

(2 results)
  • 2001 Annual Research Report
  • 2000 Annual Research Report
  • Research Products

    (11 results)

All Other

All Publications (11 results)

  • [Publications] Fujiwara S et al.: "Epiplakin, a novel member of the plakin family"J.Boil.Chem.. 276・16. 13340-13347 (2001)

    • Related Report
      2001 Annual Research Report
  • [Publications] Iyama K et al.: "Differential expression of two exons of the α1(XI) collagen gene"Matrix Biol.. 20・1. 53-61 (2001)

    • Related Report
      2001 Annual Research Report
  • [Publications] Sumiyoshi H et al.: "Type XIX collagen is expressed transiently during myoblast"Dev.Dynamics. 220・2. 155-162 (2001)

    • Related Report
      2001 Annual Research Report
  • [Publications] Chen Y et al.: "Cis-acting elements regulate alternative splicing"Matrix Biol.. 20・8. 589-599 (2001)

    • Related Report
      2001 Annual Research Report
  • [Publications] 吉岡秀克 他: "軟骨に発現するコラーゲン遺伝子の選択的スプライシング"Connective Tissue. (in press).

    • Related Report
      2001 Annual Research Report
  • [Publications] 住吉秀明 他: "XIX型コラーゲンに関する最近の知見"Connective Tissue. (in press).

    • Related Report
      2001 Annual Research Report
  • [Publications] Saito K et al: "Differential expression of mouse α5(IV) and α6(IV) collagen gene"J.Biochem.. 128・3. 427-434 (2000)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Hirakawa S et al: "The brain link Protein-1 (BRALI)"Biochem. Biophys Res.Commun.. 276・3. 982-989 (2000)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Fujiwara S et al: "Epiplakin, a novel member of the plakin family"J.Biol.Chem.. (in press). (2001)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Iyama K et al: "Differential expression of two exons of the α1(XI) collagen gene"Matrix Biol.. (in press). (2001)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report
  • [Publications] Sumiyosi H et al: "Type XIX collagen is expressed transiently during myoblast"Dev.Dynam.. (in press). (2001)

    • Related Report
      2000 Annual Research Report

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Published: 2000-04-01   Modified: 2016-04-21  

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