| Project/Area Number |
13033015
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Review Section |
Biological Sciences
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
内海 利男 信州大学, 繊維学部, 助教授 (50143764)
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| Project Period (FY) |
2001 – 2002
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2002)
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| Budget Amount *help |
¥3,600,000 (Direct Cost: ¥3,600,000)
Fiscal Year 2002: ¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Fiscal Year 2001: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
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| Keywords | リボソーム / リボソームRNA / リボソームタンパク質 / GTPaseセンター / 高度好熱性細菌 / RNA-タンパク質相互作用 / L7 / L12 / L10 / RNA-蛋白質相互作用 / L11 |
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| Research Abstract |
翻訳反応の駆動部となるリボソームGTPaseセンターを構成するタンパク質の構造と機能面の解析を、原核生物の高度好熱性細菌Thermus thermophilusと真核生物の蚕の両系を用いて行い、以下のような成果が得られた。
1.高度好熱性細菌タンパク質の分析
(1)GTPaseセンターを構成するタンパク質L7/L12, L10, L11をそれぞれ、大腸菌を用いて大量発現させ、精製した。
(2)rRNA断片を用いた結合分析により、得られたリボソームタンパク質が23S rRNAの1070領域に集合することを確認した。
(3)大腸菌リボソーム中の相同タンパク質と置換して、高いリボソーム機能を確認した。
(4)理化学研究所の横山グループとの共同研究で、タンパク質複合体の結晶化を試みている。
2.蚕タンパク質の分析
(1)原核L7/L12に対応する蚕P1とP2両タンパク質、およびL10とL11の相同体であるP0とeL12の大腸菌発現系を構築し、タンパク質精製法を確立した。
(2)分子間相互作用の分析により、P1-P2間結合性を検出し、これがP0との結合、およびP0のrRNAとの結合性を誘発することを明らかにした。この結果により、原核L7/L12ホモダイマーに対応するタンパク質が真核リボソームではP1-P2ヘテロダイマーであることが明らかにされた。
(3)蚕P0.P1-P2複合体とeL12は大腸菌リボソームの相同タンパク質と置換され、リボソーム上で真核伸長因子の受容生に関する機能を保持した。
(4)真核型GTPaseセンターの特徴となる、P1-P2ヘテロダイマーを大量に調製した。目下、結晶化を試みている。
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