固形癌の微小転移に対する遺伝子診断法および治療法の開発

• Project/Area Number: 13218151
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Aichi Cancer Center Research Institute
• Principal Investigator: 中西 速夫 愛知県がんセンター, 腫瘍病理学部, 室長 (20207830)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山村 義孝 愛知県がんセンター, 腫瘍病理学部, 研究員 (20270720)
• Project Period (FY): 2001 – 2002
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2001)
• Budget Amount: ¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000); Fiscal Year 2001: ¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000)
• Keywords: 胃癌 / リアルタイムPCR / 微小転移 / 腹膜転移 / CEA / 腹膜洗浄細胞診 / GFP / 化学療法

Research Abstract

本研究の目的は定量的リアルタイムPCR法を用いた遺伝子診断法により微小転移を高感度に検出し、現在唯一利用可能な化学療法を含め、微小転移を標的とする効果的な治療法を確立することにより、胃癌患者の生存率の改善を図ることである。これに従い、本年度は以下の諸点を明らかにした。
1 既に申請者らが200例以上の症例を用いて行ったRetrospective studyによりその意義が確立しているCEAを指標とした定量的リアルタイムRT-PCR法(Kodera, Nakanishi, et al., Ann. Surg. in press)をヒト胃癌の腹腔洗浄細胞診に代わりうる高感度検出法として実用化し、その臨床的有用性を検証するためにProspective study(厚生労働省認可の高度先進医療)を開始した。これまでのところ約50例の症例の収集をおこない、平均1年のFollow up期間で予後の判明している30例中12例が細胞診陰性、リアルタイムRT-PCR法陽性であり、このうち3例に腹膜再発を認めており、期待にそう結果が得られつつある。また多施設共同研究のためのリアルタイムRT-PCR法の共通プロトコールの作成をおこなった。
2 本法を胃癌のリンパ節微小転移、大腸癌の末梢血液中癌細胞の検出にも応用、細胞組織学的診断や免疫染色に比べ高感度な検出法であることを証明し、Molecular stagingの可能性を示した。またサイトケラチン20(CK20)を指標とするリアルタイムRT-PCR法を用いた尿中移行上皮癌細胞に対する定量的検出法も確立し、細胞診に比べ高感度でしかも非侵襲的であり有用な補助診断法となりうる可能性を示した(Inoue, Nakanishi et al., J. Urol. 2001)。
3 GFP(緑色螢光タンパク)遺伝子導入ヒト胃癌の腹膜微小転移モデルを作成し、微小転移の5-FU系抗癌剤に対する化学感受性を検討した。その結果、微小転移は進行した腹膜転移に比べ化学療法感受性が高く、進行した転移と異なり治療により生存率が改善されうることを示した。

Research Products

• [Publications] Kodera Y., Nakanishi H., et al.: "Quantitative detection of disseminated free cancer cells in peritoneal washes with real-time RT-PCR : A sensitive predictor of outcome for gastric carcinoma patients"Ann. Surg.. (in press). (2002)
• [Publications] Munesue S., Nakanishi H., et al.: "The role of syndecan 2 in regulation of actin-cytoskeletal organization of Lewis lung carcinoma-derived metastatic clones"Biochem. J.. 362(in press). (2002)
• [Publications] Inoue T., Nakanishi H., et al.: "Real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction of urinary cytokeratin20 detects transitional cell carcinoma cells"J. Urol.. 166・6. 2134-2141 (2001)
• [Publications] Ito S., Nakanishi H., et al.: "Real-time observation of micrometastasis formation in the living mouse liver using a GFP-tagged rat tongue carcinoma cell line"Int. J. Cancer. 93・2. 212-217 (2001)
• [Publications] Ogawa K., Nakanishi H., et al.: "Establishment of rat hepatocellular carcinoma cell lines with differing metastaticpotential in nude mice"Int. J. Cancer. 91・6. 797-802 (2001)
• [Publications] 中西速夫, 小寺泰弘, 立松正衞: "リアルタイムRT-PCR法による腹腔内遊離癌細胞の定量的検出とその意義"癌と化学療法. 28・6. 784-788 (2001)
• [Publications] Nakanishi H., Kodera Y., et al.: "Rapid quantitative detection of free cancer cells in the peritoneal cavity of gastric cancer patients with real-time CEA RT-PCR using hybridization probes. In Rapid cycle real-time PCR: Methods and applications. Genetics and Oncology, eds. Dietmaier/Wittwer/Sivasubramanian."Springer-Verlag. Heidelberg.(in press). (2002)