種々の細胞膜レセプターからのシグナル伝達におけるGPIアンカーの役割
| Project/Area Number |
13770160
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Immunology
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
大石 一人 阪大, 微生物病研究所, 助手 (60273702)
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| Project Period (FY) |
2000 – 2001
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2002)
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| Budget Amount *help |
¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000)
Fiscal Year 2002: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 2001: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
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| Keywords | GPIアンカー / トランスアミダーゼ / PIG-S / PIG-T / 翻訳後修飾 |
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| Research Abstract |
以前、我々はGPIアンカーをタンパク質に転移するステップに関与しているトランスアミダーゼは、GAA1とGPI8の2つの遺伝子産物の複合体であることを報告したが、本研究の課程で、2つの新規コンポーネントPIG-SおよびPIG-Tを同定し機能を解析した。
1、GPI8にFLAGおよびGSTのタグをつけて、GPI8の欠損細胞株に発現させ、抗FLAG抗体およびグルタチオンビーズでトランスアミダーゼを精製した。この精製サンプルには4つのタンパク質が含まれていたので、そのN末端のアミノ酸シークエンスを行った。その結果、2つは既知のGAA1とGPI8であったが、あとの2つは新規のコンポーネントでありPIG-SおよびPIG-Tと命名し、遺伝子をクローニングした。
2、PIG-SおよびPIG-Tのノックアウト細胞株を作製し解析したところ、PIG-SおよびPIG-TはともにGPIアンカーのタンパク質への転移に必須なこと、GPIアンカー型タンパク質とトランスアミダーゼとの酵素-基質中間体の形成のステップに働いていることを明らかにした。
3、4つのコンポーネントにそれぞれ異なるタグを付けてCHO細胞に導入し、可溶化後抗タグ抗体で免疫沈降し、それぞれのコンポーネント間の結合を調べたところ、GAA1とGPI8の発現はPIG-Tの発現に依存性であることから、PIG-Tはトランスアミダーゼの構築に重要な役割を果たしていることが明らかになった。
以上の結果をEMBOJ.(2001)20:4088-4098に発表した。
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Report
(1 results)
Research Products
(2 results)
