| Project/Area Number |
13877042
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Bacteriology (including Mycology)
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
平潟 洋一 長崎大学, 医学部附属病院, 講師 (50238341)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
上平 憲 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (80108290)
河野 茂 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (80136647)
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| Project Period (FY) |
2001 – 2002
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2002)
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| Budget Amount *help |
¥1,700,000 (Direct Cost: ¥1,700,000)
Fiscal Year 2002: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
Fiscal Year 2001: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000)
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| Keywords | 国際情報交換 / 細菌感染 / 緑膿菌 / 薬剤耐性 / 薬剤排出システム / 病原性 / 組織侵入性 / 交際情報交換 / 組織侵 |
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| Research Abstract |
組織侵入性の高い緑膿菌PA01株を親株として、gene replacement法を用いて、MexA-MexB-OprM、MexC-MexD-OprJ、MexX-MexY-OprMの3つのeffluxシステムのdeletion mutant、および各ユニット(MexBなど)のdeletion mutantを作成した。変異株の作成は、海外共同研究者であるKeith Poole(Queen's大学、カナダ)と共同で行なった。これらの菌株の組織侵入性について、すでに報告したMDCK(Madin-Darby canine kidney)細胞モノレイヤーシステムを用いたpenetration assay (Y. Hirakata, et al. J Infect Dis 2000)、BALB/c系マウスを用いた内因性敗血症モデル(Y. Hirakata, et al. Infect Immun 1993)で評価を行なった。以下の新しい知見が得られ、その結果はJ Exp Med誌に掲載された。
(1)MDCKモノレイヤーシステムにて親株と比較してMexA-MexB-OprM変異株の透過性は極度に低下していた。
(2)gentamicin invasion assayおよび電子顕微鏡(透過型および走査型)を用いて、親株とMexA-MexB-OprM変異株のMDCK細胞表面への付着性および侵入性について比較検討した結果、親株は感染後30分ほどで侵入し、一方MexA-MexB-OprM変異株は侵入に3時間を要した。
(3)親株は内因性敗血症モデルにおいて、経口投与後、マウス腸管に定着増殖し、cyclophosphamide投与により血管内に侵入し全身性敗血症を惹起し、100%の死亡率を呈したが、MexA-MexB-OprM変異株はマウスに敗血症を起こさなかった。
(4)親株の培養上清の存在下でMexA-MexB-OprM変異株を感染させると組織侵入性の回復が得られた。
(5)MexA-MexB-OprM変異株にmexA-mexB-oprM遺伝子をcomplimentすると組織侵入性の回復が得られた。
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