核酸医薬(NF-κB decoy)を用いた遺伝子放射線治療

• Project/Area Number: 13877139
• Research Category: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Radiation science
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 田中 英一 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (10324774)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 森下 竜一 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (40291439) ; 大関 修治 大阪大学, 遺伝情報実験センター, 助手 (80093384) ; 井上 武宏 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (10159981)
• Project Period (FY): 2001 – 2002
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2002)
• Budget Amount: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000); Fiscal Year 2002: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000); Fiscal Year 2001: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
• Keywords: 核酸医薬 / NF-κB / decoy / 放射線 / 遺伝子治療 / HVJ / アポトーシス / 放射線治療 / 癌 / デコイ / NF-kappaB / 転写因子

Research Abstract

【背景と目的】
転写因子NF-κBは、細胞を生存に導くための中心的な因子であると考えられている。本研究はおとり型核酸医薬(NF-κB decoy)を癌細胞に導入することにより、放射線感受性の増感を図るものである。
【方法ならびに成績】
1)HVJ-Liposome法によるdecoy導入の検討
ヒト舌癌細胞SASにおけるHVJ-liposome法によるdecoyの導入効率を明らかにするため、FITCで蛍光ラベルしたNF-κB decoyを導入した。導入24時間後にNF-κB decoyのSAS細胞核への導入を認めた。
2)NF-κBのDNA結合能の検討
NF-κB decoyによるNF-κBのDNA結合能の抑制を検討するため、Gel shift assayを行った。放射線照射5Gyにて、NF-κBのDNA結合能は増加した。これに対し、NF-κB decoy導入群においては、NF-κBの著明なDNA結合能低下を認めた。
3)アポトーシスへの影響の検討
NF-κB decoyによるアポトーシス細胞の割合の変化を検討するため、ヘキスト染色にて、放射線2.5Gy・5Gy照射後のアポトーシス細胞の割合を定量化した。
NF-κB decoy導入群において、有意なアポトーシス細胞の増加を認めた。
4)細胞増殖への影響の検討
NF-κB decoyによる細胞増殖への影響を検討するため、放射線2.5Gy・5Gy照射から72時間後の細胞数の変化を検討した。NF-κB decoy導入群において、有意な細胞増殖の抑制を認めた。
【総括】
HVJ-liposome法によりNF-κB decoyを効率的に細胞核へ導入し、NF-κBのDNA結合を抑制することを示した。そしてこのDNA結合阻害により、アポトーシス細胞が増加し、放射線感受性の増感が起こることが示唆された。