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ポーリネラ・クロマトフォラの珪酸沈着と被殻構築に関わるタンパク質の同定と進化

Research Project

Project/Area Number 13J00631
Research Category

Grant-in-Aid for JSPS Fellows

Allocation TypeSingle-year Grants
Section国内
Research Field Biodiversity/Systematics
Research InstitutionUniversity of Tsukuba

Principal Investigator

野村 真未  筑波大学, 生命環境科学研究科, 特別研究員(DC2)

Project Period (FY) 2013-04-01 – 2015-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2014)
Budget Amount *help
¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Fiscal Year 2014: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 2013: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Keywordsポーリネラ / 質量分析 / 被殻形成 / 細胞 / シリカバイオミネラリゼーション / プロティスト / 原生生物 / 進化
Outline of Annual Research Achievements

前年度はシリカバイオミネラリゼーションの進化を探るため、新規に確立したポーリネラ・クロマトフォラの株を用いてトランスクリプトーム解析を行い、データベースから珪酸質被殻関連タンパク質を探索し、シリカトランスポーター遺伝子を同定した。シリカトランスポーターはこれまでに、ストラメノパイル系統群に属する珪藻とオピストコンタ系統群の襟べん毛虫からのみ報告であったが、今回リザリア系統群に属するポーリネラにおいて初めて同定した。しかし、アミノ酸配列は多様性が高く、今回同定したシリカトランスポーターが細胞膜上もしくは珪酸沈着小胞の膜上に存在するか否かはわかっていない。そこで、本年度はシリカトランスポーターに対する抗体の作成を試みた。ペプチド抗体および発現タンパク質を用いたポリクローナル抗体の作成を試みたが、ウエスタンブロット及び前年度に確立した間接蛍光抗体法を用いた細胞染色の結果、特異性の高い抗体は作出されなかった。
さらに、新規に確立した増殖速度の比較的早い株を用いてポーリネラを大量培養し、単離珪酸質鱗片からタンパク質を抽出してLC-MS/MSを用いて同定を行った結果、新規被殻関連タンパク質が前年度に同定されている。しかし、SDS-PAGEの結果では、新規珪酸質被殻関連タンパク質を含むであろうバンドが複数検出されており、さらにたくさんのタンパク質同定をする必要があると考え、LC-MS/MSにおける試料作成や分析条件の改良を行った。その結果、さらに多くのタンパク質を単離鱗片から検出することができた。現在、バイオロジカルレプリケートをとり、論文投稿の準備中である。

Research Progress Status

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Report

(2 results)
  • 2014 Annual Research Report
  • 2013 Annual Research Report
  • Research Products

    (9 results)

All 2014 2013

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (7 results)

  • [Journal Article] Detailed process of shell construction in the photosynthetic testate amoeba Paulinella chromatophora (Euglyphid, Rhizaria)2014

    • Author(s)
      Mami Nomura, Takuro Nakayama, Ken-ichiro Ishida
    • Journal Title

      Journal of Eukaryotic Microbiology

      Volume: (印刷中) Issue: 3 Pages: 317-321

    • DOI

      10.1111/jeu.12102

    • Related Report
      2013 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] アメーバの『ガラスの殻』建築の様子をはじめて観察!2014

    • Author(s)
      野村真未, 石田健一郎
    • Journal Title

      化学

      Volume: Vol. 69 Pages: 74-74

    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] 有殻アメーバ Paulinella chromatophoraにおける珪酸質被殻構築過程における微小管・アクチン繊維の観察2014

    • Author(s)
      野村真未、石田健一郎
    • Organizer
      日本植物学会
    • Place of Presentation
      神奈川県 川崎市 明治大学生田キャンパス
    • Year and Date
      2014-09-12 – 2014-09-14
    • Related Report
      2014 Annual Research Report
  • [Presentation] Fine Structure Observation during siliceous shell formation of a testate amoeba Paulinella chromatophora (Euglyphid)2014

    • Author(s)
      Mami Nomura, Ken-ichiro Ishida
    • Organizer
      Biology of plastids - towards a blueprint for synthetic organelles
    • Place of Presentation
      ポーランド・プルトゥスク
    • Year and Date
      2014-06-21 – 2014-06-26
    • Related Report
      2014 Annual Research Report
  • [Presentation] 有殻アメーバ Paulinella chromatophoraにおける珪酸質被殻構築過程の微細構造および微小管・アクチン繊維の観察2014

    • Author(s)
      野村真未、石田健一郎
    • Organizer
      日本細胞生物学会
    • Place of Presentation
      奈良県 奈良市 奈良県新公会堂
    • Year and Date
      2014-06-11 – 2014-06-13
    • Related Report
      2014 Annual Research Report
  • [Presentation] 有殻アメーバポーリネラ・クロマトフォラにおける珪酸質被殻形成過程の微細構造観察2013

    • Author(s)
      野村真未・石田健一郎
    • Organizer
      第8回バイオミネラリゼーションワークショップ
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2013-11-30
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] Fine structure observation during siliceous shell formation of a testate amoeba Paulinella chromatophora (Euglyphid)2013

    • Author(s)
      Mami Nomura, Ken-ichiro Ishida
    • Organizer
      国際生物地学学会
    • Place of Presentation
      名古屋
    • Year and Date
      2013-11-02
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] 有殻アメーバPaulinella chrematophoraの珪酸質被殻構築過程の微細構造観察2013

    • Author(s)
      野村真未・石田健一郎
    • Organizer
      日本植物学会第77回大会
    • Place of Presentation
      札幌
    • Year and Date
      2013-09-15
    • Related Report
      2013 Annual Research Report
  • [Presentation] Fine structure observation during siliceous shell formation of a testate amoeba Paulinella chromatophora (Euglyphid)2013

    • Author(s)
      Mami Nomura, Ken-ichiro Ishida
    • Organizer
      国際藻類学会
    • Place of Presentation
      オーランド、アメリカ
    • Year and Date
      2013-08-08
    • Related Report
      2013 Annual Research Report

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Published: 2014-01-29   Modified: 2024-03-26  

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