WT1アッセイを用いた、白血病及び類縁疾患の遺伝子診断

• Project/Area Number: 14030044
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 杉山 治夫 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (70162906)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岡 芳弘 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (20273691) ; 尾路 祐介 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (20294100) ; 坪井 昭博 大阪大学, 医学系研究科, 客員助教授 ; 川上 学 大阪大学, 医学系研究科, 寄附講座教員 ; 小川 啓恭 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (80194447)
• Project Period (FY): 2002 – 2004
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2004)
• Budget Amount: ¥25,100,000 (Direct Cost: ¥25,100,000); Fiscal Year 2004: ¥9,000,000 (Direct Cost: ¥9,000,000); Fiscal Year 2003: ¥8,100,000 (Direct Cost: ¥8,100,000); Fiscal Year 2002: ¥8,000,000 (Direct Cost: ¥8,000,000)
• Keywords: WT1 / Wilms' tumor gene / 白血病 / 遺伝子診断 / WT1アッセイ

Research Abstract

方法
1.WT1ペプチドを用いた白血病に対する免疫療法の第I/II相臨床試験として、WT1ペプチドを投与されたAML患者の白血病細胞の微小残存細胞量(MRD : Minimal Residual Disease)をWT1アッソセイを用いてフォローした。
2.患者
HLA-A*2402で、CRであるがMRDが陽性の3名のAML患者(NO.21,23,24)。FAB分類では、No.21はM4Eの33才、男性、No.23はM1、44才、女性、No.24はM3の60才、女性。
3.WT1 vaccination
No.21の患者には、天然型WT1ペプチド(CMTWNQMNL)3.0mg/bodyをモンタナイドアジュバントとともに2週間毎に皮内投与した。No.23とNo.24の患者には、改変型WT1ペプチド(CYTWNQMNL)3.0mg/bodyをモンタナイドアジュバントとともに2週間毎に皮内投与した。
4.WT1アッセイ
WT1 vaccinati0n中、適宜、末梢血(PB)や骨髄(BM)のWT1mRNA量をreal-time RT-PCR法で測定した。
結果
1.No.21のAML(M4E)の患者ではWTI vaccination前、WT1レベルが異常でMRDの存在が示唆されたが、WT1 vaccination3回後に、WT1レベルが正常化した。しかし継続投与の判定のために時間を要し、WT1 vaccination 3回目の後中断したところ、1ヶ月後には、WT1レベルが再び異常高値となったが、WT1 vaccinationを再開したところ、WT1レベルが急速に低下し、正常化した。その後再び約1ヶ月半、WT1 vaccinationを中断したところ、再度WT1レベルが上昇したが、WT1 vaccinationの再開により徐々に低下し、WT1 vaccinationのスタートから約1年10ヵ月後(2週間毎にWT1 vaccinationを継続している)、WT1レベルは正常化している。
2.No.23のAML(M1)の患者では、WT1 vaccination前のBMでのWT1レベルの異常高値であったが、WT1 vaccination後、WT1レベルは低下し、4回のWT1 vaccination後、正常化した。1年8ヶ月目もWT1レベルは正常化している。
3.No.24のAML(M3)の患者ではWT1 vaccinationのスタート時、PBでのWT1レベルが異常高値(6×10^<-4>であったが、WT1 vaccinationの2週間毎1回の継続で、WT1レベルが徐々に低下し、1年7ヵ月後には、IX10^<-4>程度に低下した。PBのWT1レベルの1×10^<-4>は、まだわずかなMRDの存在を示唆すると思われる。一方、血小板数は、WT1 vaccination前は5.0万程度で、白血病細胞の残存になる骨髄抑制が示唆されたが、WT1 vaccination後、血小板数はゆっくりと上昇し、1年7ヵ月後には、12-3万程度に回復し、白血病細胞の減少が示唆された。
考察
WT1 vaccination後のAML患者の臨床所見と、WTIアッセイによるWT1レベルとの間に相関が認められWT1アッセイは、AMLのMRDのフォローに有効であることが示された。

Research Products

• [Journal Article] Induction of WT1 (Wilms tumor gene)-specific cytotoxic T lymphocytes by WT1 peptide vaccine and the resultant cancer regression. (2004)
  • Author(s): Oka, Y.et al.
  • Journal Title: Proceedings of National Academy of Science USA 101・38 Pages: 13885-13890
• [Publications] Ogawa, H. et al.: "The usefulness of monitoring WT1 gene transcripts for the prediction and management of relapse following allogeneic stem cell transplantation in acute type leukemia."Blood. 101. 1698-1704 (2003)
• [Publications] Elisseeva, O.A.: "Humoral immune responses against Wilms' tumor gene WT1 product in patients with hematopoietic malignancies"Blood. 99. 3272-3279 (2002)
• [Publications] Shichishima, T.: "HLA class II haplotype and quantitation of the WT1 gene in Japanese patients with paroxysmal nocturnal hemaglobinuria(PNH)"Blood. 100. 22-28 (2002)
• [Publications] Makita, M.: "Antilung cancer effect of WT1-specific cytotoxic T lymphocytes"Clinical Cancer Research. 8. 2626-2631 (2002)
• [Publications] Tsuboi, A.: "Enhanced induction of human WT1-specific cytotoxic T lymphocytes with a 9-mer WT1 peptide modified at HLA-A^*2402-binding residues"Cancer Immunology and Immunotherapy. 51. 614-620 (2002)
• [Publications] Ogawa, H.: "The usefulness of monitoring WT1 gene transcripts for the prediction and management of relapse following allogeneic stem cell transplantation in acute type leukemia"Blood. 101. 1698-1704 (2003)
• [Publications] Oka, Y.: "WT1 peptide-based immunotherapy for patients with overt leukemia from myelodysplastic syndome(MDS) or MDS with myelofibrosis"International Journal of Hematology. (in press).